酶热生物传感技术及其乳品安全的快速分析课件.pptVIP

不同方法优缺点对比 cost per sample Time(min/sample) Continuity Detection limit Modified ET method ≈0.1$ 6 min Semi 0.5u/ml Cylinder plate method[5] n/a 24hr No 4u/ml Chromogenic method[7] n/a 30min~24hr n/a 0.49u/ml 第三十一页，共四十三页。 ET特点 分析方法简单、仪器操作方便 待测奶样品无需特殊预处理 测量快速（约5-7分钟/每样品） 检测成本低（约1元人民币/每样品） 灵敏度高（β-内酰胺酶的检测低于0.5 U 酶活性/ml 奶样品） 适合原料奶、奶制品和其他液态食品中的β-内酰胺酶的检测 可用于其它酶的检测或酶底物的分析 第三十二页，共四十三页。 乳腺炎奶检测 牛乳腺炎影响奶质量，严重的会引起人体中毒，因此需要严格控制原料乳中的乳腺炎感染状况。乳腺炎奶通常其乳酸的含量会增加数十倍。测量乳品中的乳酸含量不仅可控制原料乳的质量，还可追踪成品乳制品的产奶牛的健康状况。因此，乳品中乳酸的检测对于控制乳品质量具有非常重要的意义。 第三十三页，共四十三页。 牛奶中的乳酸的检测 Comparison of the results of buffer samples and milk samples. (A)buffer samples, with flow-rate of 0.75ml/min and sample volume of 250μL. (B) 1:1 diluted milk samples with flow-rate of 0.75ml/min and sample volume of 250μL. 第三十四页，共四十三页。 分析结果 固相酶柱在34天后其活性维持在 82.5%（每天测量0.5mM的乳酸数次） 牛奶样品（1：1稀释）的乳酸检测精度为62 μM 检测线性范围 0.06 – 1 mM以上（用乳酸氧化酶） 检测时间5分钟/样品 第三十五页，共四十三页。 * L U N D U N I V E R S I T Y S C A N D I N A V I A N E X C E L L E N C EF R O M L U N D U N I V E R S I T Y 第一页，共四十三页。 谢斌 瑞典Lund大学纯与应用生物化学系 武汉 2013.03 Enzyme Thermistor - 酶热生物传感技术及其乳品安全的快速分析 第二页，共四十三页。 什么是生物传感器? 电活性物质 电极 pH变化 pH电极 热量 热敏电阻 光 光敏元件 质量变化 压电晶体 酶 抗体 微生物 细胞 分子识别 信号传感 电信号 生物传感器原理 第三页，共四十三页。 生物量热 – 一种万能的生物分析平台 生物反应中的热量变化是一种常见形式 酶-底物催化的特异性 生物反应产生足够的热量 测量系统对光、 浊度、电等不敏感 采用差分量热，环境温度变化影响小 极高的分析精度（10-5 ℃) 适合于有机相 热敏传感器无需校正 样品（如，血液、奶等）一无需预处理，可直接进样分析 采用流动注射分析，检测快速、成本低 （约1元人民币/样品） 可连续、在线分析 第四页，共四十三页。 早期设计 样品 酶 Peltier 器件 酶 热敏电阻 样品 酶流动管 热敏电阻 热酶电阻 (a) 静态分析 (b) 静态或流动分析 (c) 流动分析 第五页，共四十三页。 酶热生物分析系统 数据处理 信号放大 固相酶柱 酶热传感器 流动泵 进样阀 进样管路 缓冲载液 第六页，共四十三页。 酶热生物分析仪 第七页，共四十三页。 生物固相 固态表面固相及摧化反应 第八页，共四十三页。 酶热生物传感原理 ΔT = ΔH· nρ Cγ Tr Tm S C ΔT = Tm - Tr Cγ : 反应器热容量 ΔH : 反应中热焓的变化 nρ : 反应物摩尔数 S : 底物 P : 产物 P 第九页，共四十三页。 酶催化热焓变化 ● 多数酶催化反应为放热反应, ΔH 0 - ΔH=-100 kJ/mol 为典型的过氧化物酶和氧化酶的热 焓，其它酶在同一数量级 氧化酶可与过氧化物酶共同固相 -