pp基因工程的基本操作程序.pptxVIP

第2节基因工程的操作程序基因工程的四大步骤目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与及表达产物的测定阅读P72并思考1什么是目的基因？2获取目的基因的方法有哪些？从基因文库中获取目的基因基因组文库基因文库 部分基因文库（如cDNA文库）基因文库的构建过程供体细胞的全部DNA限制酶大量DNA片段拼接到载体上导入受体细胞扩增基因组文库利用PCR技术扩增目的基因PCR的全称 聚合酶链式反应PCR的原理 体外的DNA复制 利用PCR技术扩增目的基因PCR的条件模板原料引物　酶控制温度——目的基因DNA——四种脱氧核苷酸——某单链DNA分子片段——耐热的DNA聚合酶——PCR仪自动调控利用PCR技术扩增目的基因PCR的过程变性(90-95℃)复性(55-60℃)延伸(70-75℃)cDNA基因文库的构建过程逆转录 双链DNAmRNA单链DNAcDNA文库（部分基因组文库）从基因文库中分离获取目的基因依据目的基因的有关信息。如根据基因的核苷酸序列 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。用化学方法直接人工合成基因较小，核苷酸序列已知。条件二基因表达载体的构建—核心用切目的基因相同的限制性内切酶切割质粒二基因表达载体的构建—核心二基因表达载体的构建—核心目的基因原核生物基因非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结合位点非编码区编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点真核生物基因外显子内含子二基因表达载体的构建—核心1基因表达载体的组成目的基因启动子终止子标记基因等二基因表达载体的构建—核心2基因表达载体的构建目的a.使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。b.使目的基因能够表达和发挥作用。三目的基因导入受体细胞 1目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？ 2目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 3目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？三目的基因导入受体细胞1.目的基因导入植物细胞常用的方法 农杆菌转化法基因枪法 花粉管通道法农杆菌的特点a.易感染双子叶植物和祼子植物。b.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上三目的基因导入受体细胞1.目的基因导入植物细胞农杆菌转化法的导入过程转入农杆菌构建基因表达载体导入植物细胞稳定维持和表达三目的基因导入受体细胞２.目的基因导入动物细胞常用的方法 显微注射技术操作程序a.先提纯含目的基因的表达载体 b.从动物体内取出卵(受精卵）c.显微注射仪进行显微注射 d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体三目的基因导入受体细胞3.目的基因导入微生物细胞原核生物的特点繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。增加细胞壁的透性，与细胞膜无关大肠杆菌的转化过程用Ca2+处理细胞→ 感受态细胞重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子四目的基因的检测与鉴定1导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？2什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？3利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？四目的基因的检测与鉴定目的基因的检测内容和方法1 目的基因插入2 目的基因是否表达DNA分子杂交技术基因探针核酸分子探针是指特定的已知核酸片段，能与互补核酸序列退火杂交，用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测。 满足（1）必须是单链，（2）带有容易被检测出来的标记物。3.在遗传工程技术中,下列何种目的基因一般以直接分离的方法获得( )A.人的胰岛素基因B.蚕的蚕丝蛋白基因C.芽孢杆菌的抗虫基因D.菜豆储藏蛋白基因4.1976年,的科学家首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌,并获得了表达,此文中的表达是指该基因在大肠杆菌( )A.能进行DNA复制B.能传递给细菌后代C.能合成生长抑制素释放因子D.能合成人的生长素3.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的,在基因操作的基本步骤中,不进行减基互补配对的步骤是( )A.人工合成目的基因B.目的基因与载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测和表达基因工程同步测验一选择题(每项只有一个正确答案)1．下列有关限制性核酸内切酶的说法，正确的是A．限制酶主要是从真核生物中分离出来的B．限制酶的识别序列只能由6个核苷酸组成C．限制酶能识别双链DNA分子的某种特定的核酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开D．限制酶切割产生的DNA片段末端都为黏性末端基因工程同步测验 2．有关基因工程叙述正确的是(　)A．限制酶只在获取目的基因时才用B．重组质粒的形成是在细胞内完成的C．只要目的基因进入细胞就