临床检验初级检验技师：单克隆抗体的制备.docxVIP

一、单克隆抗体的两大产生方法 (一)动物体内诱生法 先在小鼠腹腔注射液体石蜡或弗氏不完全佐剂，一周后将杂交瘤细胞悬液注射腹腔，1～2周后，无菌抽取腹水，离心取上清液即可。 (二)体外培养法 将杂交瘤细胞置培养瓶中培养，待培养液颜色改变或细胞过多开始死亡时，收集上清液，离心去掉碎片及细胞即可。 二、单克隆抗体的纯化 从培养液或腹腔积液获得的单克隆抗体，不需要纯化即可应用于日常诊断或定性研究。 由于其中含有大量来自培养基、宿主或克隆细胞本身的一些无关蛋白，如果用于免疫标记测定，如放射性核素、酶、荧光素或生物素标记等，必须进一步分离和纯化。 三、单克隆抗体的性质鉴定 (一)Ig类型测定 (二)特异性测定 (三)抗体效价测定 (四)表位测定 (五)亲和力测定 (六)染色体分析 四、单克隆抗体的特性 (一)单克隆抗体的特性 1.高度特异性 2.高度的均一性和可重复性 3.弱凝集反应和不呈现沉淀反应 4.对环境敏感性 (二)单克隆抗体的优点 1.杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体 2.可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体 3.由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等 4.由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗 (三)单克隆抗体的局限性 1.由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。 2.单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。 3.制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。