荧光定量PCR基础知识.pptxVIP

;纲 要;定量 PCR 介绍;什么是荧光定量PCR;定量PCR体系;定量PCR原理;光学结构简图;典型的PCR四阶段;PCR理论方程 N = N0x (1+e)n;荧光PCR信号方程;什么是阈值;CT值由阈值确定;数学关系;定量PCR的优点;荧光定量PCR化学原理;两种化学方法;Taqman探针法原理;TaqMan探针设计要点;MGB探针;MGB探针的优势;染料法原理;溶解曲线：derivative view;两种方法的比较;淬灭基团种类;不同滤光片对应的发光集团;仪器的校正;5 仪器的维护和校正;定义;纯荧光校正;纯染料光谱;ROI校正;背景校正;加热槽荧光污染的判断;清除热槽中的污染;确认已除去热槽中的荧光污染物;定量PCR实验要素;目标基因 —样品 标准曲线 —标准品 监控污染 —阴性对照 监控系统故障 —阳性对照 校准物理误差 —参比荧光;1 目标基因—样品;选择样本的提取方法;选择RT-PCR方法;预扩增;预防 PCR 过程中的污染;目标样品用量;2 标准曲线—标准品;标准品（浓度/拷贝数）;制作标准曲线;检查相关系数;去除离散值的点;3 监控污染-阴性对照;No RT Control ——探针可能检测到基因组DNA;4 阳性对照-监控系统故障;内参-校准生物学误差;5 ROX ? 参比荧光-校准物理误差;提高复孔间的精确度;数据分析;绝对定量与相对定量;绝对定量举例;绝