黄连中盐酸小檗碱的分离提纯.docVIP

黄连中盐酸小檗碱的分离提纯 黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。 黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。 黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。 [目的要求] 1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。 2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。 3．通过查阅资料并结合所学知识，初步了解并完成实验方案的设计。 [实验原理] 小檗碱是一种季铵碱，为黄色针状结晶，Mp.145℃(乙醚),游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂。其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。冷水溶解度分别 利用这些特性提取盐酸小檗碱常用的方法有酸水法、石灰乳法、醇提法、超声提取法等。从生产成本、方法可操作性、盐酸小檗碱的提取率和制备的精度考虑，我们采用传统的酸水浸渍法。 【仪器和试剂】 1.仪器与材料：分析天平，1500mL平底烧瓶，酒精灯，石棉网，烧杯若干，铁架台1个，漏斗1个，滤纸若干，胶头滴管若干，玻璃棒，抽滤设备如真空泵、抽滤瓶、布氏漏斗托(密封圈)、真空管(橡胶管)、滤纸、布氏漏斗，氧化铝柱层析器材等。 2. 试剂与原料：黄连粉50g，0.5% H2SO4 溶液，浓盐酸，蒸馏水，固体工业食盐等。 【实验过程】 1、精制盐酸小檗碱 a、精密称取黄连粉50g于1500ml平底烧瓶，用0.5% H2SO4溶液1000 ml浸泡24h，虹吸上清液； b、药渣再用 0.5% H2SO4溶液 1000 ml浸泡12h，虹吸上清液，同法共收集浸提液4000ml； c、全部上清液中加入石灰乳调 pH 8～9，过滤，除去沉淀； d、滤液中加浓盐酸调结pH 1～2，入10%( W/V )固体工业食盐，搅拌溶解，冷藏过夜； e、取沉淀，少量冷水冲洗，加热水溶解，趁热过滤，滤液加浓盐酸调结pH 1～2，用 10% ( W/V )固体工业食盐处理工艺，冷藏过夜； f、取沉淀，用少量蒸溜水洗至 PH 为5，在60℃以下真空干燥，再重结晶，即得盐酸小檗碱精品。 2、氧化铝柱层析分离纯化盐酸小檗碱 a 氧化铝层析柱制备: 取一支2.0cm×30cm层析柱,柱底覆盖少许脱脂棉,柱内加入一定体积95%乙醇,打开活塞,让溶液慢慢流出。此时将已搅拌混均的氧化铝95%乙醇悬液(层析氧化铝120-140目,25-30g)不断加入层析柱内,至加完后,轻敲柱体,使各部分氧化铝均匀紧密一致。待氧化铝沉降稳定(表面应平整),表面保持有少量溶剂(0.5cm左右)，关闭活塞。 b 进样: 取约50 mg左右的盐酸小檗碱粗品，用尽量少的无水乙醇溶解制成溶液。用吸管吸取样液沿柱壁四周小心加入,打开层析柱活塞使有溶剂滴下,待液面近与氧化铝表面相平,迅速用少量无水乙醇将柱壁样液洗下,待液面下降后再洗,反复多次,直至表面溶剂无色,让样品完全持留于氧化铝中,并保留有1cm左右溶剂,此时加入少许石英砂覆盖氧化铝表面,并沿管壁加入足量洗脱剂。在此过程中要准确迅速,洗涤溶剂尽量少并尽可能不要扰动,氧化铝表面平整。 c 洗脱: 使溶剂继续滴下,(注意向柱内添加无水乙醇,保持柱体湿润),洗脱样品。按每流分5-10 mL收集洗脱液,并着重收集各个色段(从下至上):鲜黄色、桔红色(棕色段可不再洗脱),收集到的洗脱液经浓缩后进行检测鉴定。 d 氧化铝再生回收: 层析后弃去氧化铝柱上端带深色部分,取出剩余氧化铝,依次用10％氢氧化钠溶液和水洗涤,晾干后经400℃ 【注意事项】 1．浸泡药材粗粉的硫酸水溶液，浓度不宜过高，一般为0．2-0．3％为宜。若硫酸水溶液浓度过高，小檗碱可成为硫酸氢小檗碱，其溶解度（1：100）明显较硫酸小檗碱（1：30）为小，降低提取效率。硫酸水溶液浸出效果与浸泡时间有关，浸泡12小时约可浸出小檗碱80％，浸泡24小时，可浸出92％。常规浸出应浸泡多次，使小檗碱提取完全。若时间充足可多次提取，提高提取率。 2．盐析时，加入氯化钠的量，以提取液量的10％计算，即可达到析出盐酸小檗碱的目的。氯化钠的用量不宜过多，否则溶液的相对密度增大，造成盐酸小檗碱微细结晶呈悬浮态难以下沉。 3．在精制盐酸小檗碱过程中，因盐酸小檗碱放冷极易析出结晶，所以加热煮沸后，应迅速抽滤或保温过滤，防止溶