实验一植物组织总DNA的提取及DNA的浓度测定4学时.pptVIP

南京晓庄学院 生物实验教学中心 实验十一 植物组织总DNA的提取及DNA的浓度测定 掌握用CTAB法提取植物总DNA的方法和基本原理。 学习利用紫外分光光度法测定DNA溶液的浓度。 一、实验目的 第一页，共十六页。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。 CTAB, SDS等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。 第二页，共十六页。 再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入异丙醇或乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即得植物总DNA溶液。之后可加入RNA酶降解其中的RNA，再用氯仿除去RNA酶，得到较纯的DNA制剂。 第三页，共十六页。 DNA的吸收光谱峰在260 nm处，据计算，测定此波长下DNA溶液的OD值，当OD260=1时，双链DNA含量约为50 μg/ml，据此可用紫外分光光度计测定溶液中DNA含量。