核糖体与核酶.pptVIP

关于核糖体与核酶 第一页，共三十一页，2022年，8月28日 第一节 核糖体的类型与结构 核糖体是细胞内蛋白质合成的细胞器，唯一功能是按mRNA指令由氨基酸合成多肽链。 核糖体几乎存在于所有细胞,从原核细胞到真核细胞均含有大量核糖体,线粒体和叶绿体中也含核糖体,仅红细胞等少数特化细胞中没有 核糖体是一种颗粒状结构,没有被膜,主要是核糖体RNA(rRNA),占60%,核糖体蛋白(r蛋白),占40% 还有其它功能的核糖核蛋白颗粒,常是小分子RNA(snRNA)与蛋白组成的颗粒,参与RNA的加工、RNA编辑、基因表达调控等. 第二页，共三十一页，2022年，8月28日 一、核糖体的基本类型与成分 1、基本类型 (1)70S的核糖体:由50S和30S两个亚基组成；原核细胞的核糖体,叶绿体和线粒体核糖体也接近70S (2)80S的核糖体: 由60S和40S两个亚基组成 大小两个亚基常游离于细胞质基质中,只有在合成蛋白质时才结合在一起，胎链合成完毕后，大小亚基解体，又游离于细胞质中 第三页，共三十一页，2022年，8月28日 2、核糖体的化学组成 核糖体大小亚基都是由rRNA和核糖体蛋白组成 (1)原核细胞的70S核糖体中: 50S大亚基含33种蛋白质和两种rRNA：23S rRNA和5S rRNA。 30S小亚基含有21种蛋白质和一个16S rRNA (2)真核细胞的80S核糖体中 60S大亚基含49种蛋白质及3种rRNA：28S rRNA、5.8S rRNA和5S rRNA。 40S小亚基含33种蛋白和一种18S rRNA 第四页，共三十一页，2022年，8月28日 原核生物与真核生物核糖体成分的比较 第五页，共三十一页，2022年，8月28日 第六页，共三十一页，2022年，8月28日 第七页，共三十一页，2022年，8月28日 二、核糖体的结构 （一）核糖体结构与功能的分析方法 ?离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； ?纯化的r蛋白与纯化的rRNA进行核糖体的重组装， 显示核糖体中r蛋白与rRNA的结构关系 ?双向电泳技术可显示出E.coli核糖体在装配各阶段中， 与rRNA结合的蛋白质的类型 ?双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究r蛋白在 结构上的相互关系 ?电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖 体的亚单位上的定位。 ?70S核糖体小亚基16S rRNA结构及与全部r蛋白关系 第八页，共三十一页，2022年，8月28日 (二)原核细胞的核糖体结构 1、核糖体蛋白 E.coli核糖体小亚基含21种蛋白质,分别命名为S1-S21;大亚基含33种蛋白质,分别命名为L1-L33 2、核糖体rRNA E.coli小亚基含16S rRNA，共有1542个核苷酸，不同来源的16S rRNA的序列组成具保守性。含四个结构域，每个结构域都有46%碱基配对，形成螺旋的柄状结构。每个柄状结构都很短，不到8bp，且并不都是完全配对。 第九页，共三十一页，2022年，8月28日 核糖体小亚单位rRNA的二级结构(a) E.coli 16S rRNA；（红色为高度保守区） (b) 酵母菌18S rRNA，它们都具有类似的40个臂环结构，其长度和位置往往非常保守；P、E分别代表仅在原核或真核细胞中存在的rRNA的二级结构。 第十页，共三十一页，2022年，8月28日 3、细菌核糖体模型 在该模型中确定了一些重要的功能区。如在小亚基中确定了mRNA和tRNA结合位点，并确定了催化肽键形成的位点位于大亚基。确定了小亚基中部突出的平台部分含有16S rRNA的3‘端，此部位有与mRNA结合的序列。与蛋白质合成起始相关的tRNA、蛋白质因子结合位点位于相邻小叶中。大亚基还具有催化肽键形成和GTP水解的功能区。 第十一页，共三十一页，2022年，8月28日 E.coli （a）核糖体小亚单位中的部分r蛋白与rRNA的结合位点） （b）及其在小亚单位上的部位  第十二页，共三十一页，2022年，8月28日 （三）核糖体的装配 1、rRNA的转录与加工 (1)真核生物:18S、5.8S和28S基因是串联在一起,每个基因被间隔区隔开。该基因在RNA聚合酶Ⅰ作用下，首先转录成一个45S的前rRNA，然后被加工成41S前rRNA，再被切割成20S前rRNA和32S前rRNA，20S rRNA加工为成熟的18S rRNA，32S rRNA加工为28S和5.8S rRNA 5SrRNA基因位于不同染色体上,由RNA聚合酶Ⅲ转录,仅进行简单加工或不加工 第十三页，共三十一页，2022年，8月28日 (2)原核生物:细菌中5SrRNA基因与16S和23S组成一个转录单位:1