核酸的生物合成 (3).pptVIP

关于核酸的生物合成 (3);中心法则;;第十一章 核酸的生物合成;第一节 DNA的生物合成;一、DNA的半保留复制 （Semi-Conservation Replication） ;（一）概念和实验证据;半保留复制的实验证据;;DNA半保留复制的生物学意义;（二） 复制起点、方向和方式;2、复制方向及方式;复制过程中SV40 DNA分子的电镜照片;目前已发现30多种酶及蛋白质因子参与DNA复制;Nucleophilic attack; 在大肠杆菌中发现主要有三种DNA聚合酶，分别为： DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ ; DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ 亚基数目 1（单体酶） 多亚基酶 多亚基酶 5’→3’聚合活性 + 中 + 很低 + 很高 3‘→5’外切活性 + + + 5‘→3’外切活性 + — +;;3′;5’→ 3’外切酶活性 ; DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ ;DNA聚合酶Ⅲ;;2、 DNA连接酶（ligase）;;(四)DNA的半不连续复制;3‘;冈崎片段合成后由DNA聚合酶Ⅰ切除RNA引物并催化合成一段DNA填补留下的空隙。 再由DNA连接酶把他们连成一条完整的子代链，称为滞后链。;(五)?E.coli.染色体DNA复制过程 ;1、起始;涉及主要酶系;20个DnaA结合在四组9bp重复区，形成起始复合物，DNA环绕此复合物。 三组13bp重复区依次变性，产生开放型复合物。 DnaB（解螺旋酶）在DnaC协助下与开放复合物结合，进一步解链。 解链时带来的扭曲张力还需DNA旋转酶（属DNA拓扑异构酶Ⅱ）引入负超螺旋消除。; 单链结合蛋白( SSB）结合在单链区，阻止复性和保护单链DNA不被核酸酶降解 引发体：引物合成酶与各种蛋白质因子构成的复合体（引发体），以DNA为模板合成RNA引物（ 6-10个碱基）;2、延伸;复制体沿着复制叉方向前进，同时进行前导链和滞后链的合成。 一分子的 DNA pol III. 协同合成前导链和滞后链，因此滞后链必须绕成一个突环。 ;3、DNA合成的终止;;两个复制叉在终止区相遇而停止复制，复制体解体，期间大约有50-100 bp未被复制。 其后两条亲代链解开，同过修复方式填补空缺???此时两环状染色体互相缠绕，成为连锁体 由拓扑异构酶Ⅳ切开，再连接，使两个连锁的DNA双链彼此分开;⑴ DNA解螺旋酶解开双链DNA。 ⑵ SSB结合于DNA单链。 ⑶ DNA旋转酶引入负超螺旋，消除复制叉前进时带来的扭曲张力。 ⑷ DNA引物酶(在引发体中)合成RNA引物。 ⑸ DNA pol.Ⅲ在两条新生链上合成DNA。 ⑹ DNA polⅠ切除RNA引物，并补上DNA。 ⑺ DNA ligase连接一个冈崎片段。;（六）真核生物染色体DNA的复制 ;真核生物染色体DNA复制过程中 组蛋白的装配;真核生物染色体DNA末端复制的问题;;端粒（telomeres） ：是真核细胞染色体末端所特有的结构，有许多串（1000串或更多）短的重复序列组成，通常3’末端链是富含G的短序列，如人是TTAGGG，而且该链具有12-16个核苷酸的单链突出端，可作为随后链最后一个冈崎片段的引物模板。 功能： ⑴保证线性DNA的完整复制 ⑵保护染色体末端 ⑶决定细胞寿命;端粒酶（telomerase）：端粒末端的重复序列是通过端粒酶将其加到染色体末端。 端粒酶含有RNA和蛋白质（起DNA聚合酶的作用）两种组分，RNA分子约150bp，含有与重复端粒结构互补的一个片段，可作为端粒链合成的模板。 端粒酶可通过5’端于染色体的3’端互补结合，以自身为模板使DNA3’末端延伸，合成一个重复单位后，再向前移动一个单位。 端粒的3’末端又可回折，作为引物，合成其互补链。 端粒酶类似于逆转录酶，它只合成与酶自身的RNA模板互补的DNA片段。 动物的生殖细胞中由于端粒酶的存在，端粒一直保持一定的长度。但体细胞随着分化而失去端粒酶活性，这样细胞连续分裂，使端粒不断缩短一定程度时，细胞就停止生长。恶性肿瘤细胞端粒酶表达多。 ?;端粒合成的一种模型;DNA的半保留复制