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关于核酸生物合成 第一页，共二十二页，2022年，8月28日 一、DNA的生物合成 （一）DNA的半保留复制 居中 重 轻 0 1 2 3 4 第二页，共二十二页，2022年，8月28日 单链环状DNA主要采用滚环式复制 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 第三页，共二十二页，2022年，8月28日 （二）DNA复制的起点和方向 最早研究DNA复制起点和方向的是J.Cairns（1963年）。 θ型 第四页，共二十二页，2022年，8月28日 单向复制 i 双向复制 观察到的放射自显影图象 第五页，共二十二页，2022年，8月28日 真核生物DNA的多起点复制 第六页，共二十二页，2022年，8月28日 18% 质粒ColE1的单向复制示意图 单向复制 第七页，共二十二页，2022年，8月28日 （三）原核细胞的DNA复制 1. DNA聚合酶Ⅰ（PolⅠ） （dNMP）n + dNTP Mg2+ （dNMP）n+1 + PPi 特点 （1）不能催化从无到有的聚合反应。 （2）催化的反应只能在引物的3′延伸。 （3）3′接上的核苷酸决定于模板链。 （4）具有5′→3′和3′→5′外切酶活性。 第八页，共二十二页，2022年，8月28日 PPP OH + OH PPP OH PPP PPP OH OH + P DNA合成方向不可能是3′→5′的解释 第九页，共二十二页，2022年，8月28日 2. PolⅡ和PolⅢ 三种聚合酶特性的比较 1985年等首先报道了PCR（多聚酶链式反应） 5′ 5′ 1 热变性 2 退火 5′ 5′ 5′ 5′ 3 DNA聚合酶 5′ 5′ 5′ 5′ 重复1，2，3 PCR反应全过程 第十页，共二十二页，2022年，8月28日 3. 双链DNA复制的分子机制 （1）冈崎片段和半不连续复制 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 复制叉上DNA合成的三种可行性 第十一页，共二十二页，2022年，8月28日 （2）冈崎片段的RNA引物 利福酶素对RNA聚合酶有抑制作用。 氯霉素对蛋白质合成有抑制作用。 噬菌体M13 DNA复制的引物是RNA。由引物酶催化。 引物RNA在复制过程中暂时存在，最后通过PolⅠ的5′→3′外切酶活力水解。 （3）DNA连接酶 催化一条DNA链的3′末端与相邻的另一条DNA链的5′末端之间的磷酸二酯键的合成。 其它功能：（1）修补双螺旋DNA中单股的缺口；（2）连接线状双螺旋DNA以产生环状DNA；（3）重组过程中将几段DNA链连接起来。 第十二页，共二十二页，2022年，8月28日 （4）母本DNA双链的分离 DNA解螺旋酶（DNAhelicase） 拓扑异构酶Ⅱ（type Ⅱ topoisomerase） （5）DNA聚合酶的“校对”作用 DNA聚合酶的3′→5′外切酶活力是校对新生DNA链和改正聚合酶活性所造成“错配”的一种手段。 4. 真核细胞DNA的复制 （1）真核细胞DNA复制有多个起始点。 （2）至少有5种DNA聚合酶，即α、β、γ、δ 、ε 。 （3）端粒由端粒酶催化复制。 生物细胞DNA复制分子机制的基本特点 第十三页，共二十二页，2022年，8月28日 5. 反转录作用 1970年Temin和Baltimore同时从RNA病毒中发现反转录酶。 利用反转录酶可制造与任何RNA（mRNA、tRNA、rRNA）的互补DNA（cDNA）。 6. DNA的损伤与修复 （1）DNA损伤的各种结构变化 ①碱基缺失或插入 ②碱基改变 ③形成TT二聚体 第十四页，共二十二页，2022年，8月28日 （2）修复机制 ①光复活 ②切除修复 ③重组修复 ④SOS修复 （3）修复缺陷和疾病 癌症；着色性干皮病；贫血病。 第十五页，共二十二页，2022年，8月28日 重组修复 5′ 5′ 重组 修复 5′ 第十六页，共二十二页，2022年，8月28日