核酸的分离纯化.pptVIP

关于核酸的分离纯化 第一页，共四十八页，2022年，8月28日 分子生物学研究之所以从20世纪中叶开始得到高速发展，其中最主要的原因就是现代分子生物学研究方法、特别是基因操作和基因工程技术的进步。 DNA分子的切割与连接 核酸分子杂交 凝胶电泳 细胞转化 核酸序列分析 基因的人工合成 基因操作 基因的定点突变 PCR扩增等 核心技术 第二页，共四十八页，2022年，8月28日 基因工程诞生的基础 1、理论上的三大成就 2、技术上的二大发明 第三页，共四十八页，2022年，8月28日 三大成就 ： 1. 40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题； 1928 Frederick Griffith 1944 Oswald Avery Transformation of Streptococcus pneumoniae 1952年Hershey和Chase证实噬菌体DNA 侵染细菌实验 第四页，共四十八页，2022年，8月28日 2. 50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半 保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题； X-ray source Crystallized DNA Rosalind Franklin拍出 了第一张能反映DNA美丽双螺旋结构的X射线照片 Maurice Wilkins Photographic film 1953- Franklin Wilkins 第五页，共四十八页，2022年，8月28日 Description of the 3-D structure of DNA Francis Crick James Watson 三位科学家因为对这一 成果的贡献，共享1962年的诺贝尔生物学奖 第六页，共四十八页，2022年，8月28日 Conservative Model Semiconservative Model Frank Stahl Matt Meselson Parent cell First replication Second replication 1958 -Matthew Meselson Franklin Stahl proved that DNA replication in bacteria follows the semiconservative pathway 第七页，共四十八页，2022年，8月28日 3. 50年代末至60年代，相继提出了中心法则和操纵子学说,成功地破译了遗传密码，充分认识了遗传信息的流动和表达。 Jacob and Monod 第八页，共四十八页，2022年，8月28日 但是，如果没有分离和富集单一DNA分子的技术，科学家就无法对这类物质进行直接的生化分析。 第九页，共四十八页，2022年，8月28日 两大技术保证： 1.DNA的体外切割和连接 1962年Arber 发现限制性核酸内切酶， 1967Gellert发现了 DNA 连接酶（DNA ligase ） 第十页，共四十八页，2022年，8月28日 一把特殊的剪刀—限制性内切酶的发现阿尔伯(Arber)、史密斯(Smith)和内森斯(Nathans)，获1978年诺贝尔生理学和医学奖 第十一页，共四十八页，2022年，8月28日 Herbert Boyer, Stanley Cohen 1972年获得第一个重组DNA分子 (实现不同来源DNA的重组) Herbert Boyer 第十二页，共四十八页，2022年，8月28日 1972 - Paul Berg Produced first recombinant DNA using EcoRI EcoRI recognition sites λ phage DNA EcoRI cuts DNA into fragments Sticky end SV40 DNA The two fragments stick together by base pairing DNA ligase Recombinant DNA 第十三页，共四十八页，2022年，8月28日 1973 - Boyer, Cohen Chang Transform E. coli with recombinant plasmid Stanley Cohen Annie Chan Herbert Boyer Kanamycin resistance gene Plasmid pSC101 Tetracycline resistance gene E. coli transformed with recombinant plasmid Transformed cells plated onto medi