肿瘤分子检测与质量控制.pptVIP

深圳市人民医院病理科 分子实验室 姜阳阳 2015-10-27 肿瘤分子检测方法与质量控制 肿瘤：机体在各种致癌因素作用下，局部组织细胞在基因水平上失去对自身生长的调控，导致机体异常增生而形成的新生物。 医学发展历程的启示 经验医学 循证医学 精准医学 诊断靠治疗后期经验积累。 诊断治疗以人群、科学研究证据指导临床实践。 诊断治疗以个体为基础，更加提前、具体与精确。 分子时代 循证医学：循证医学是从20世纪90年代以来在临床医学领域内迅速发展起来的一门新兴学科，是一门遵循科学证据的医学，其核心思想是“任何医疗卫生方案、决策的确定都应遵循客观的临床科学研究产生的最佳证据”，从而制定出科学的预防对策和措施，达到预防疾病、促进健康和提高生命质量的目的。 腺癌 鳞癌 21% 25% 36% 7.8% 3.3% 2.6% 2.2% 0.8% 0.7% 0.7% 0.1% 肺腺癌：EGFR\KRAS\BRAF\ALK-ROS1\RET等检测已是共识； 肺鳞癌发生模式不同，检测靶标以扩增为主，同时EGFR、ALK\ROS1某些病例也有必要检测。 我们可以用的分子生物学手段： 实时荧光PCR方法（扩增阻碍突变系统法（Amplification Refractory Mutation System，ARMS）、PCR-高分辨溶点曲线分析（HRM）、数字PCR等） PCR-杂交法（膜上、芯片[基因芯片] 、乳胶颗粒[Luminex]） PCR-Sanger测序 PCR-焦磷酸测序 新一代高通量测序 PCR-SSCP、RFLP、dHPLC等 荧光原位杂交（FISH） 直接杂交 免疫组化 生物学：研究生命的科学，它既研究各种生命活动的现象和本质，探讨生物发生和发展的规律，又研究生物之间以及生物与环境之间的相互关系。 杂交：两个基因型不同的个体相交。 基因芯片：genechip固定有寡核苷酸、基因组DNA或互补DNA等的生物芯片。利用这类芯片与标记的生物样品进行杂交，可对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。 基因：是具有遗传效应的DNA片段。 杂交：两个基因型不同的个体相交。 免疫：指机体事变和排除非己抗原异物，以维护内部环境平衡和稳定的生理功能。其功能包括防御、自身稳定和免疫监视三方面。 分子病理检测的主要方法 基因突变 (SNPs) 拷贝数改变 (Copy Number Variation, CNV) 基因重排 （Gene rearrangement) 检测技术 蛋白(质)表达 (Protein expression) 免疫组织化学（IHC）… 基因表达 (mRNA/RNA expression） 反转录+荧光定量PCR （RT-qPCR)… FISH… DNA sequencing， ARMS… 检测对象 检测基因 检测水平 EGFR，KRAS，BRAF， BRCA, BCR-ABL，JAK2… EML4-ALK，ROS1，HER2， RET… BRCA1，TOP2A，TYMS… EGFR，EML4-ALK， HER2… 分子病：由于基因或DNA分子的缺陷，致使细胞内RNA及蛋白质合成出现异常、人体结构与功能随之发生变异的疾病。DNA分子的此种异常，有些可随个体繁殖而传给后代。如镰状细胞性贫血，是合成血红蛋白的基因异常所致的贫血疾患。 基因：是具有遗传效应的DNA片段。 基因突变：由于DNA分子中发生碱基对的增添，缺失或改变，而引起的基因构造改变。 免疫：指机体事变和排除非己抗原异物，以维护内部环境平衡和稳定的生理功能。其功能包括防御、自身稳定和免疫监视三方面。 基因表达：指基因转录及翻译的过程，即生成具有生物学功能产物的过程。 是RT-PCR平台上的特异扩增技术（易开展） 共发表300多篇文献 著名的大型临床研究 - 如IPASS、INFORM等 国际肺癌协会专家共识中国基因突变检测专家共识日本临床专家共识 IPASS INFORM 大型临床研究所采用 ARMS技术——被临床证明的肿瘤基因突变检测技术 肺癌：起源于支气管黏膜上皮的癌。 基因突变：由于DNA分子中发生碱基对的增添，缺失或改变，而引起的基因构造改变。 肿瘤：机体在各种致癌因素作用下，局部组织细胞在基因水平上失去对自身生长的调控，导致机体异常增生而形成的新生物。 DNA 基因重排 融合mRNA或5’/3’ mRNA差异表达 嵌合蛋白表达 肺癌中ALK基因变异的表达调控 FISH/CISH NGS RT-PCR 5’/3’比较qRT-PCR RACE-PCR … IHC 肺癌：起源于支气管黏膜上皮的癌。 变异：生命有机体在生殖过程中同种个体直接的差异。 荧光原位杂交技术（FISH） 2个信号分离直径的要求，使实际应用中结果难以判断