- 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
HN亚型禽流感病毒感染性克隆的构建会计学第1页/共80页汇报提纲: 文献综述 RNA干扰对A型流感病毒基因表达及病毒复制 的抑制作用的研究 H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/327/2004 全基因组克隆、测序及其感染性克隆的构建 文献综述第2页/共80页1 文献综述 文献综述第3页/共80页禽流感的发生与流行 禽流感(Avian Influenza, AI),是由A型流感病毒引起的一种禽类的烈性传染性疾病或疾病综合征。1878年,首次在意大利发现了禽流感的流行。高致病性禽流感(Highly Pathogenic Avian Influenza, HPAI)是由A型流感病毒中H5、H7亚型流感病毒引起,目前已经呈世界性分布, 全世界50多个国家和地区(OIE数据)报道了高致病性禽流感的发生和流行。我国自1996年首次报道分离到H5N1亚型高致病性禽流感病毒之后,其流行一直呈上升趋势。 文献综述第4页/共80页世界上高致病性禽流感感染人的发病与死亡情况(截至2006-6-03) 第5页/共80页第6页/共80页 文献综述RNA干扰的历史研究和发现过程 1995年康奈尔大学Guo Su博士试图(1995)用反义RNA 去阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans) 中的par1 基因的表达时, 意外发现给对照实验组线虫注射正义RNA,不但不增加该基因的表达,反而产生与反义RNA同样的结果。 1998年2月,华盛顿卡耐基研究院的Fire博士和马萨诸塞大学癌症中心的Mello博士才证实Guo Su博士发现的正义RNA 抑制基因表达的现象是由于体外转录的RNA中污染了少量双链RNA 而引起。 第7页/共80页 文献综述RNA干扰的历史研究和发现过程 Fire和Mello实验表明在线虫消化道中注入双链RNA不但可以阻断整个线虫的同源基因表达,还会导致其子一代的同源基因沉默。他们将这一现象首次称为RNA 干扰(RNA interference,RNAi)。 RNA干扰现象随后在昆虫、锥虫、果蝇、涡虫、斑马鱼、真菌、植物拟南芥等生物及哺乳动物细胞株中也分别被发现。 文献综述第8页/共80页RNA干扰的基本原理 ATP、RNA解旋酶第9页/共80页 文献综述RNAi在病毒研究中的应用 通过作用于病毒特定基因的siRNA抑制病毒在细胞内的复制,siRNA可作用于细胞中病毒靶受体以干扰病毒的侵染,期望达到治疗病毒性疾病的目标。RNA干扰技术已经在多种病毒研究中得到了成功的应用:人类免疫缺陷病毒Ⅰ型、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、甲型流感病毒、口蹄疫病毒、西尼罗病毒和SARS冠状病毒等。 第10页/共80页 文献综述病毒的感染性克隆病毒的感染性克隆其实就是模拟病毒复制、转录等病毒生命周期,人工构建病毒的过程。病毒的感染性克隆也称为病毒的反向遗传操作技术(Reverse Genetic Manipulaton)。第11页/共80页 文献综述反向遗传学及其操作技术反向遗传学是直接从生物的遗传物质入手来阐述生物生命发生的本质现象,与之相关的各种技术统称为反向遗传学操作技术。病毒反向遗传操作技术解决了对RNA 病毒基因组难以操作这一困扰研究者多年的难题,开创了病毒研究的新时代。第12页/共80页禽流感病毒的复制第13页/共80页流感病毒反向遗传操作技术的发展历程 以辅助流感病毒为基础的反向遗传操作系统核糖核蛋白转染法RNA聚合酶Ⅰ方法完全以克隆的cDNA为基础的反向遗传操作系统RNA聚合酶Ⅰ系统:17质粒系统RNA聚合酶Ⅰ系统:12质粒系统双向RNA聚合酶Ⅰ/Ⅱ转录系统: 8质粒系统第14页/共80页以辅助流感病毒为基础的反向遗传操作系统 核糖核蛋白转染法: 采用T7 RNA聚合酶体外转录系统,NS-CAT-NS,体外转录 RNA聚合酶Ⅰ方法: RNA聚合酶I(pol I)启动子代替T7 RNA聚合酶启动子第15页/共80页完全以克隆的cDNA为基础的反向遗传操作系统 17质粒系统 12质粒系统 第16页/共80页RNA聚合酶Ⅰ/Ⅱ转录系统: 8质粒系统2000年,Hoffmann等建立了RNA聚合酶Ⅰ/Ⅱ系统, vRNA和mRNA的合成来自于一个模板,不需要构建专门的蛋白表达质粒,为拯救病毒而构建的质粒数将大大减少。 这一系统采用共培养的293T细胞和MDCK细胞,8质粒转染细胞后, RNA聚合酶Ⅰ转录产生负链vRNA,RNA聚合酶Ⅱ合成正链mRNA 。转染的293T细胞中产生的病毒随后将感染MDCK细胞并大量复制。第17页/共80页RNA聚合酶Ⅰ/Ⅱ转录系统: 8质粒系统第18页/共80页双向RNA聚合酶Ⅰ/Ⅱ转录系统: 8质粒系统第19页/共80页流感病毒反向遗传操作技术的应用 利用反向遗传学操作技术研究流感病毒的致病性利用反
您可能关注的文档
最近下载
- 贵州省2024年高职(专科)分类考试招生中职毕业生文化综合考试数学.docx VIP
- HP DeskJet 2700 多功能一体打印机中文说明书.pdf
- (完整版)2025年全国自考《马克思主义基本原理概论》真题及答案汇总.docx VIP
- 欧科PT300变频器说明书.pdf
- 全版《边城》ppt课件.pptx VIP
- 2-5《无常》(思维导图) 统编版七年级语文上册大单元教学.docx VIP
- 2025年辅警招聘考试试题库及答案详解(各地真题).docx
- 在泥沙中崛起三门峡(连载3).doc VIP
- 高龄患者的麻醉要点.ppt VIP
- 天安人寿附加吉祥树终身重大疾病保险条款0101.docx VIP
文档评论(0)