细菌的培养及鉴定思路.pptxVIP

会计学标本采集原则第1页/共107页1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂5.采样后立即送检6.送检标本应注明来源和检验目的第2页/共107页咳痰方法病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰以清晨第二口痰为佳标本采集后放置时间不超过2小时 第3页/共107页清洁中段尿液尽量取早晨第一次尿液嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水冲洗尿道口排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿男性病人翻转包皮，清洗尿道口排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿 采集标本后立即送检！标本接收原则第4页/共107页严格实行核对制度 ：包括姓名、性别、年龄、门诊号/住院号、病床号、标本类型、容器、标识、检验目的等。所有拒收或退回标本均应在登记本上登 记，登记内容包括：病人姓名、病区、床号 送检医师、送检项目、拒收(退回)原因、拒收时间、经手人等痰标本涂片染色低倍镜下分类第5页/共107页 分级 白细胞（个） 上皮细胞（个） A2510 B2525 C1025A、B两种情况的痰适合做培养，C不合格，应重新留标本第6页/共107页哥伦比亚血平板—营养要求高的细菌巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、脑膜炎球菌和淋球菌用中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用M-H平板—细菌药敏用TCBS平板—弧菌科细菌用沙包氏平板—真菌培养用真菌显色平板—真菌培养用罗氏培养基—分枝杆菌用常用的培养基种类和用途接种工具第7页/共107页接种针和接种环 ：由三部分组成，即环（针）、金属柄和绝缘 柄接种针：用于穿刺接种细菌接种环：用于固体、液体培养基的细菌接种安装环(针)的螺口(约8mm)2—5cm柄约22cm绝缘柄约7.5cm5—8cm金属柄约14.5cm第8页/共107页 器具：接种环（上）和接种针（下） 第9页/共107页操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）Aseptic area10-20cm外焰内焰焰芯第10页/共107页细菌接种的基本程序杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本灭菌接种环沾取标本接种杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境灭菌接种环第11页/共107页细菌接种法平板划线接种法： ★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法：★分区划线法：适用于含菌量较多的标本★连续划线法：适用于含菌量较少的标本液体培养基接种法穿刺接种法 :用于观察细菌动力斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数第12页/共107页分区划线法(3区)第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环连续划线法第13页/共107页第14页/共107页第15页/共107页细菌培养法一般培养（需氧培养）：★培养温度：35℃（采用恒温培养箱）★培养时间：18～24h二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等细菌在固体培养基中的生长现象第16页/共107页菌落★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。第17页/共107页菌 落菌落与菌苔第18页/共107页第19页/共107页菌落的三个类型：1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S型2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M型第20页/共107页 S型菌落第21页/共107页R型菌落第22页/共107页M型菌落细菌在液体培养基中的生长现象第23页/共107页混浊沉淀：多见于链状排列的细菌菌膜：多见于厌氧菌第24页/共107页细菌在液体培养基中的生长现象：细菌在半固体培养基中的生长现象第25页/共107页有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。第26页/共107页细菌在半固体培养基中的生长现象无动力 现象有动力 现象第27页/共107页斜面接种法第28页/共107页接种斜面后菌落生长示意图（菌苔）革兰染色第29页/共107页原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔