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血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达 郑志伟 劳海燕 余细勇 林秋雄 朱杰宁 王玲 孙硕 陈纪言 钟诗龙△ 广东省人民医院医学研究中心，广东省心血管病研究所 冠心病：全称冠状动脉粥样硬化性心脏病，是指因狭窄性冠状动脉疾病而引起的心肌缺氧（供血不足）所造成的缺血性心脏病。 讲述目录 背景 方法 检测 探讨 简述血浆循环miRNA提取检测的方法 采用前述建立的方法，在25例冠心病患者和30例健康对照中检测miRNA的表达情况。 在细胞实验进一步探讨miRNA的作用机制 冠心病：全称冠状动脉粥样硬化性心脏病，是指因狭窄性冠状动脉疾病而引起的心肌缺氧（供血不足）所造成的缺血性心脏病。 健康：不仅是没有疾病和虚弱现象，而且是一种躯体上、心理上和社会适应方面的完好状态。 细胞：是一切生物的形态结构和功能活动的基本单位；是构成生物有机体的基本结构单位；是代谢与功能的基本单位；是生物有机体生长发育的基本单位；是遗传的基本单位。 研究背景 MicroRNA是生物体内长度约为20－23个核苷酸的非编码小RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行调控。 最近研究发现血液循环中也存在miRNA，有希望作为疾病无创诊断或者疾病预后的生物标志物。 基因：是具有遗传效应的DNA片段。 血液循环：血液由心室射出，经动脉、毛细血管和静脉返回心房，这种周而复始的循环流动，称血液循环。 Solexa Whole Genome Sequencing miRNAs (21-23nt) were most abundant sequences in serum RNAs Chen et al. 2008 Cell Res. miRNA差异？ 疾病 预后，转归 血浆循环miRNA的表达 – 预测?生物标记物？ 我们的设想 我们的研究工作 研究血浆中存在的循环miRNA，建立其提取检测的方法，并且检测血浆miRNA在冠心病人中的表达情况，寻找疾病发生发展或者影响预后的生物标记物。 血浆miRNA提取检测基本流程 血浆循环miRNA提取方法 血浆miRNA 的提取 第四步 晾干，加无RNAase水进行溶解，检测浓度，保存 第一步 ProteinK 消化，Trizol LS和氯仿对血浆进行提取 第三步 离心，取得RNA沉淀，70%乙醇洗涤 第二步 异丙醇和核酸共沉淀剂对前述水相进行沉淀 消化：食物中所含营养物质在消化道内被分解称可吸收的小分子的过程。 血浆循环miRNA的检测原理 实验结果 二、miRNA提取方法学的考察（一） 1、采用外源合成的cel-miRNA-39检验提取方法的提取效率： 2、has-miR-16的累加实验 采用加入外源合成的has-miR-16 mimics，比较提取方法的有效性。 二、miRNA提取方法学的考察（二） 内源 B mimics A 三、检测miRNA在两组人群中的表达差异 Coronary artery heart disease （CHD） 25例 Healthy contron 30例 3.1、研究的一般资料—年龄 3.2、研究的一般资料—性别 P=0.155 3.3、血浆循环has-miR-126的表达量 * *