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脂肪干细胞在特定条件下定向分化形成骨骼初步研究(临床医学范文)
文档信息
:
文档作为关于“医学心理学”中“骨科学”的参考范文,为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文7425字,doc格式,可编辑。质优实惠,欢迎下载!
目录
TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1
正文 2
文1:脂肪干细胞在特定条件下定向分化形成骨骼初步研究 2
1对象与方法 3
1.1细胞与试剂 3
2.1三组干细胞培养前后特征性基因表达含量的比较 4
3结论 5
文2:中药对模拟失重大鼠骨骼肌肉系统干预的初步研究药学论文 6
1 实验材料 7
1.1 动物及饲料 7
1.2 药物 7
1.3 主要仪器 8
2 实验方法 8
2.1 造模 8
2.2 分组与给药 8
2.3 取材与检测 8
2.4 统计学方法 9
3 结果 9
4 讨论 9
参考文摘引言: 11
原创性声明(模板) 12
正文
脂肪干细胞在特定条件下定向分化形成骨骼初步研究(临床医学范文)
文1:脂肪干细胞在特定条件下定向分化形成骨骼初步研究
通讯赵娟(1984年7月-),女,讲师,长沙医学院教师,研究方向:生化与分子学,E-mail:
项目编号:2018年度长沙医学院大学生研究性学习和创新性实验计划项目-长医教[2018]77号-217;湖南省科技厅项目(湘科规材[2016]8号),创新平台编号:2016TP1029
(长沙医学院湖南长沙410219)
摘要目的分析骨形态发生蛋白9对脂肪肝细胞进行定向分化的诱导效果。方法本实验采用清洁级新西兰大白兔脂肪干细胞进行培养与分化,根据培养条件分为三组:分别是空白对照组(普通地塞米松)、条件对照组(含钙元素的地塞米松)、实验组(含钙元素的地塞米松联合骨形态发生蛋白9),分析不同诱导环境下,三组细胞定向分化的差异。结果培养后比较,RUNX2、OCN、MiR-144-3p表达含量的差异均表现出统计学意义(P0.05),两两比较,条件对照组和空白对照组、实验组和空白对照组、实验组和条件对照组之间的差异均有统计学意义(P0.05)。结论脂肪干细胞在特定环境(钙元素的地塞米松联合骨形态发生蛋白9)中可以定向分化为骨骼,表现为相关特征基因(RUNX2和OCN)的高含量表达。
关键词脂肪干细胞;特定条件下;定向分化;骨骼;骨形态发生蛋白9
骨骼肌长期以来均被视作卫星细胞或者肌前体细胞的必要来源,这些细胞在正常情况下处于静息状态,当肌肉组织受损时被激活,进而分化并彼此融合成为新的肌纤维,从而达到修复受损肌肉的目的。同时,卫星细胞还能够分裂出新生细胞来维持骨骼肌中未分化细胞的数量[1]。然而,尽管卫星细胞具有取材容易且再生分化能力强的优点,但其只能单向分化为肌细胞的特性在临床应用时却具有明显的局限性[2]。骨骼肌中还存在另外一种和卫星细胞有明显区别,即含有分化为多种细胞能力的脂肪细胞。但是不同研究均证实,这些脂肪细胞需要在特定条件下才能进行再次定向分化,因此研究脂肪干细胞的潜力越来越受到众多学者的重视。
1对象与方法
1.1细胞与试剂
(1)实验细胞:本实验采用清洁级新西兰大白兔脂肪干细胞进行培养与分化,根据培养条件分为三组:分别是空白对照组(普通地塞米松)、条件对照组(含钙元素的地塞米松)、实验组(含钙元素的地塞米松联合骨形态发生蛋白9)每组细胞为20孔板。
(2)试剂仪器:DMEM培养液、胎牛血清、ALP活性检测试剂盒、CO2细胞培养箱,OLYMPUS倒置显微系统、地塞米松、p甘油磷酸钠、维生素C、WesternBlottingECL化学发光检测试剂盒、罗氏LightCycler480荧光定量PCR仪、smad4与pActin抗体、MicroRNA
ReveeTracriptionkit试剂盒。
1.2细胞复苏:由液氮罐中迅速取出冻存的细胞,至于37℃水浴锅解冻,然后接种于一次性细胞培养瓶,加入新鲜DMEM培养液5mL,放人5070CO:培养箱内37℃培养,每2d换液1次。当贴壁细胞融合度达到预设条件,再进行传代(用0.25%的胰酶消化)
1.3成骨诱导分化:加入细胞成骨分化诱导培养液,放人37℃的CO2培养箱培养和细胞成骨分化诱导,每3d更换1次新鲜的成骨诱导培养液,整个成骨诱导过程持续3周时间,显微镜下观察细胞的生长状况以及形态变化[2]
1.4基因表达的检测:对抽提的RNA进行体外反转录实验,得到cDNA产物;反应条件为:16℃,孵育30min,42℃孵育20min,85℃加热5min,4℃伤鲜≠。以得到的cDNA为模
版,进行荧光定量PCR,采用TaqMan圆UnivealPCR
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