原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
rnai用于基因功能的鉴定和确证会计学FulenGen第1页/共40页Gene Function ScreeningChemical geneticsInhibitors and activators of biological processLoss of functionshRNA/miRNAGain of functionORF expression clonesTansfection/TransductioncellAutomated read-outmechanismTherapeutic strategy第2页/共40页Mechanism of RNAi (shRNA/miRNA)FulenGen第3页/共40页Comparison of shRNA and miRNA propertiesshRNA miRNAArchitecture short hairpin Single-strandOriginal Exogenous EndogenousNo. of intended target 1 ManyDegree of gene silence High LowComplementary to mRNA target Perfect ImperfectEffect on mRNAEndonucleolytic cleavage Repressed translationFulenGen第4页/共40页FulenGen第5页/共40页 shRNA的设计与构建 shRNA的验证 miRNA的克隆与检测 miRNA靶标的确证 基因沉默后的功能拯救FulenGen第6页/共40页第7页/共40页shRNA 表达克隆的构建27mer shRNA Oligo Design shRNA序列设计 高准确性的预测方法 茎和环序列载体选择 筛选标记和报告基因 目的细胞N27ASN1ASA (30) B (44)N1N275’ GATCGAGAGTGGAGGACGCTTTGCCTCCAAGCTCAAGAGGCTTGGAGGCAAAGCGTCCTCCACTCTTTTTTTGG 3’ 3’ CTCTCACCTCCTGCGAAACGGAGGTTCGAGTTCTCCGAACCTCCGTTTCGCAGGAGGTGAGAAAAAAACCTTAA 5’有效性检测 3-5个shRNA /基因 目的基因是否表达克隆和测序 合成引物的长度 茎环结构难以有效测序N1ASD (42) C (32)N27N27ASN1FulenGen第8页/共40页OmicsLink? shRNA表达克隆保证高表达抑制效率和最低的脱靶效应； 慢病毒载体和以哺乳动物细胞表达载体；序列已经过测序；每个基因提供4个克隆，至少有1抑制水平达到70%以上提供包含不规则序列的阴性对照克隆来比较研究。 FulenGen第9页/共40页经过验证的人类激酶组shRNA表达克隆 350个人类激酶基因的确证shRNA表达克隆 表达抑制效应都经过验证，达70％以上 低的脱靶效应。 第10页/共40页shRNA克隆用于信号通路研究qPCR Primer array 即将上市第11页/共40页 采用先进的算法，精心设计的qPCR引物 扩展长度100－250bp； PCR扩展效率90%； 每对引物的都经过扩展曲线、溶解曲线和电泳检测，包括扩展的特异性第12页/共40页MicroRNAs 由RNA Polymerase II转录ExonicNon-codingIntronicNon-codingand codingLee, et al., EMBO J. 23:4051-60 2004第13页/共40页mature and primary microRNA 的结构MatureDrosha Cleavage sitePri-miRNA/~-OHFulenGen第14页/共40页Vector-Based m
文档评论（0）