兽医现代监测诊断技术(终稿).pptVIP

聚合酶链式反应（PCR) 是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的。通过PCR技术获取病原微生物的特异DNA片段，从而为疾病诊断提供重要依据。 特点：快速； 敏感； 步骤较多。 PCR反应原理图 反转录PCR技术 即RT-PCR技术。用于检测RNA病毒。首先提取总RNA，然后加入引物在反转录酶的作用下合成cDNA，加热变性成为单链cDNA后，加入与之互补的另一引物，进行PCR反应。 分为一步法和两步法两种 RT RT-PCR反应原理图 多重PCR技术(Multi-PCR） 它是一种特殊的PCR形式，其最突出的特点是一次PCR反应．在同一反应体系中同时加入多对不同PCR引物和相应的模板，可同时检测、鉴别出多种病原体，在临床混合感染的鉴别诊断上具有其独特优势和很高的实用价值。 兽医监测诊断技术在动物疫病防控和兽医公共卫生工作中具有重要作用，是预防、控制和扑灭重大动物疫病中的重要一环，为养殖业健康发展和公共卫生安全提供保障。 前言 提纲 面临的复杂形势 动物疫病诊断技术现状 检测技术发展方向与未来展望 1 面临的复杂形势 动物疫病种类多 农业部《一、二、三类动物疫病病种名录》中列入157种；其中一类17种；二类77种；三类63种。 OIE《陆生动物卫生法典》2010版中列入94种； 包括多种动物共患病26种；牛病14种； 绵羊和山羊病11种；马病11种；猪病8种；禽病14种； 兔病2种；蜂病6种；其他疫病2种。 新发动物疫病威胁 国外威胁： 非洲猪瘟（俄罗斯）等； 周边省威胁：小反刍兽疫（西藏）、 口蹄疫A型（ 2008年湖北）等； 新发亚型： 口蹄疫亚洲I型（2005年出现）等。 动物疫病病原型别多、变异快 口蹄疫：7个型，多个亚型； 我国O型、亚洲I型（2005年4月传入中国）、A型 流感：A、B、C3个型； A型：H1~H16亚型； H5亚型：变异株不断出现…… 疫苗：-1、-4、-5株…… PRRS：1996年美洲型； 2006年变异株； 2009年欧洲型1株。 另外，还有小反刍兽疫（西藏）、疯牛病、非洲猪瘟、尼帕病……等外来重大疫病的威胁 2010年列入国家监测计划的动物疫病（16种） 高致病性禽流感、口蹄疫、高致病性蓝耳病、猪瘟 鸡新城疫、布鲁菌病、牛结核病、血吸虫病、狂犬病 牛海绵状脑病、痒病、牛传染性胸膜肺炎、牛瘟、小反刍兽疫、非洲猪瘟、蓝舌病 国家强制免疫 动物疫病 外来动物疫病 主要疫病的国家指定监测方法 病 名 指定诊断方法 口蹄疫 正向间接血凝试验、液相阻断ELISA VP1-ELISA 高致病性禽流感 血凝抑制试验（HI） 猪瘟 正向间接血凝试验、阻断ELISA 高致病性猪蓝耳病 ELISA、 鸡新城疫 血凝抑制试验（HI） 布鲁菌病 虎红平板试验、试管凝集试验 血吸虫病 斑点ELISA、免疫金标快速试纸条 牛结核病 结核菌素变态反应试验 地市级、县级实验室的适用试验技术 县级实验室 地市级实验室 凝集试验（高致病性禽流感、口蹄疫、猪瘟、新城疫等病）； ELISA（猪瘟、口蹄疫、高致病性蓝耳病等病） 县级实验室开展的试验技术 RT-PCR技术（猪瘟，PRRS 等病） 省内诊断试剂使用的现状 主要诊断试剂 提供单位有： 兰州兽医研究所 哈尔滨兽医研究所 猪瘟和口蹄疫O型正向间接血凝； 口蹄疫Ａ型、 Asia—I和 O型液相阻断ELISA； 3ABC-ELISA，VP1-ELISA； 猪圆环病毒ELISA； 禽流感H5血凝抑制抗原； 鸡新城疫血凝抑制抗原； 其他：猪蓝耳病ELISA——法国进口； 猪伪狂犬、猪细小病毒ELISA——荷兰赛迪诊断公司； 猪蓝耳病RT-PCR，猪乙型脑炎RT-PCR， 猪细小病毒PCR等——北京爱德士元亨生物技术有限公司。 疫苗种类各异、诊断试剂和方法多样 以口蹄疫为例 抗体检测试剂品种 病原检测试剂品种 正向间接血凝 琼脂凝胶免疫扩散试剂 液相阻断ELISA试剂盒 非结构蛋白ELISA试剂盒(3ABC) 结构蛋白ELISA试剂盒（VP1） 免疫胶体金试剂盒