孕妇血浆游离核酸高通量测序检测胎儿遗传异常(1).pdfVIP

孕妇血浆游离核酸高通量测序检测胎儿遗传异常 殷旭阳;陈芳;王威 【摘要】孕妇血浆中胎儿源性的游离 DNA 的发现,为无创产前检测(noninvasive prenatal testing,NIPT)奠定了科学基础.通过对孕妇外周血中的游离 DNA 进行检 测,能够以无创的方式分析胎儿的遗传特征,为产前筛查(prenatal screening)和产 前诊断(prenatal diagnosis)提供了有效的手段.新一代高通量测序技术 (nextgeneration sequencing,NGS)的发展及其在临床的广泛应用,使其在孕妇血 浆胎儿游离 DNA 检测中的应用成为必然趋势,并推动无创产前检测技术的迅猛发 展.通过孕妇血浆游离 DNA 的高通量测序,可实现胎儿的染色体非整倍体、单基因 遗传疾病、微缺失微重复的检测,也可以对胎儿基因组、DNA 甲基化组以及转录组 等信息进行分析. 【期刊名称】《中国产前诊断杂志（电子版）》 【年(卷),期】2016(008)002 【总页数】8 页(P44-51) 【关键词】孕妇血浆;胎儿游离 DNA;无创产前检测;产前筛查;产前诊断;高通量测序 【作者】殷旭阳;陈芳;王威 【作者单位】深圳华大基因研究院,广东深圳 518083;深圳华大基因研究院,广东深 圳 518083;哥本哈根大学,丹麦哥本哈根 2200;深圳华大临床检验中心,广东深圳 518083 【正文语种】中 文 【中图分类】R714.53 孕妇血浆中胎儿源性游离 DNA 的发现，为无创产前检测(noninvasive prenatal testing ，NIPT)奠定了科学基础。通过对孕妇外周血中的游离 DNA 进行检测，能 够以无创的方式分析胎儿的遗传特征，为产前筛查(prenatal screening)和产前诊 断(prenatal diagnosis)提供了有效的手段。新一代高通量测序技术 (nextgeneration sequencing,NGS)的发展及其在临床的广泛应用，使其在孕妇 血浆胎儿游离 DNA 检测中的应用成为必然趋势，并推动无创产前检测技术的迅猛 发展。通过孕妇血浆游离 DNA 的高通量测序，可实现胎儿的染色体非整倍体、单 基因遗传疾病、微缺失微重复的检测，也可以对胎儿基因组、DNA 甲基化组以及 转录组等信息进行分析。 1997 年，研究人员在一位怀男性胎儿的孕妇外周血的血浆中发现了胎儿 Y 染色体 游离 DNA[1] ，从而确定母体血浆中存在胎儿游离DNA 这一事实，并检测出胎儿 DNA 约占母体血浆总游离 DNA 的 3% ～6% ，其半衰期仅为16 分钟，说明此次 妊娠的游离 DNA 不会受到之前妊娠胎儿的影响。之后的研究发现怀有唐氏综合征 胎儿的孕妇，其血浆中的总体胎儿游离 DNA 总量要高于怀有正常胎儿的孕妇 [2]。 随着孕妇外周血游离 DNA 的研究，特别是检测技术的不断发展，孕妇外周血的血 浆逐渐成为无创检测胎儿遗传特征的理想材料。 妊娠中较常见的胎儿非整倍体，除了唐氏综合征，即 21-三体外，还有 18-三体、 13-三体，以及性染色体异常如 X 单体(Turner 综合征)等。以 21-三体为例，原理 上唐氏综合征的胎儿应释放相对其他染色体更多的 21 号染色体 DNA 序列进入母 体血浆。因此通过母体血浆的全基因组高通量测序，并分析比对到每条染色体的数 据量，将待测孕妇的数据与一组正常妊娠的孕妇的数据进行统计学比较，即可判定 待测孕妇中的胎儿染色体数目异常。这种方法已被国内外多家机构应用并证实其高 准确性[3] ，包括检测21-三体[4-9]、18-三体[4,6-9]、13-三体[6-9] ，以及性染色 体异常[3,8]和其他非整倍体[10,11]。 除全基因组测序，也可采用目标区域测序分析孕妇血浆游离DNA以检测胎儿非整 倍体。通过杂交捕获基因组上特定区域的 DNA序列继而进行测序[12,13]，或者 以多重PCR的方法[14-16]将多个SNP位点捕获和扩增，对扩增子进行测序，通 过分析杂合SNP位点的等位基因数据量差异，从而检测胎儿目标染色体的数目异 常。 2004年，Cha 等[17]发现孕妇血浆中胎儿来源的游离 DNA长度要短于母体来源 的DNA。通过对DNA片段采用双侧末端测序的策略(paired-end)，可确定血浆 中游离DNA片段的长度。研究发现，孕妇血浆中母体来源的DNA其长度峰值在 166bp，而胎儿游离DNA的长度峰值为143bp[18]。在怀有唐氏综合征胎儿的孕 妇