任务5 蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定.pptxVIP

农产品检测技术项目九 其他农产品检验任务5蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定项目九其他农产品检验一、测定意义二、测定方法及测定原理三、仪器用具四、试剂五、操作步骤六、结果计算蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定一、测定意义羟甲基糠醛是蜂蜜新鲜度品质的重要指标，当蜂蜜中羟甲基糠醛含量高时，标志着蜂蜜质量下降或贮存环境不合理。 葡萄糖有?-葡萄糖和β-葡萄糖两个异构体，它们与链式结构A存在平衡，通过链式结构A可生成大量的四氢呋喃类物质，经过脱水反应后生成5-羟甲基糠醛，5-羟甲基糠醛受热后再生成5-甲基糠醛、糖醛和其他呋喃类物质，因此糠醛、5-甲基糠醛和5-羟甲基糠醛是葡萄糖主要裂解产物。新鲜纯正的蜂蜜不含羟甲基糠醛。但随着贮存时间的延长，蜂蜜中的六碳糖，主要是葡萄糖和果糖，在酸性条件下就会部分脱水生成羟甲基糠醛。如果蜂蜜加上和贮存温度不符合要求，能加快羟甲基糠醛生成的速度。当蜂蜜中掺入转化糖等物质时，蜂蜜中也容易产生羟甲基糠醛。此外，蜂蜜还会因被掺假而含有羟甲基糠醛。因此，通过测定羟甲基糠醛的含量，可以判断出蜂蜜的新鲜程度和质量。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定二、测定方法及测定原理测定方法： GB/T 18932.18-2003《蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法 液相色谱-紫外检测法》。测定原理：蜂蜜样品中的羟甲基糠醛经HPLC反相色谱柱分离，用液相色谱仪紫外检测器检测。用标准曲线外标法定量。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定三、仪器用具1、高效液相色谱仪（配有紫外检测器）2、分析天平（感量0.001g）3、注射器（10 mL）4、过滤膜（0.45 微米）蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定四、试剂1、甲醇溶液：10%，吸取100 mL的甲醇到1 000 mL的容量瓶中，用水稀释至刻度。2、标准储备溶液：准确称取适量的羟甲基糠醛标准物质（纯度≥99%）于100 mL容量瓶，用10 mL甲醇溶解，用水稀释至刻度，配成0. 20 mg/mL的标准储备液。此溶液可在温度低于4℃冰箱中冷藏保存两个月。 3、标准工作溶液：分别吸取适量的羟甲基糠醛标准储备溶液至100 mL容量瓶中，用10%甲醇溶液释稀至刻度，配成0.10 ?g/mL，0.20 ?g/mL，1.0 ?g/mL，2.0 ?g/mL，4.0 ?g/mL，6.0 ?g/mL，10 ?g/mL标准工作溶液。当天新鲜配制。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定五、操作步骤1、试样的处理 称取10g试样，精确至0.01g，置于100mL烧杯中，加入10mL甲醇，用玻璃棒轻轻搅拌均匀，使试样完全溶解。转移至100mL容量瓶中，用水释稀至刻度，充分混匀。用0.45微米的滤膜过滤，滤液用于液相色谱仪紫外检测器测定。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定五、操作步骤2、羟甲基糠醛的色谱测定（1）液相色谱条件色谱柱：Diamonsil C18 5 ?m，250 mm×4.6mm(i.d)或相当者；流动相：甲酵+水(10+90)；流速：1.0 mL/min；检测波长：285 nm；柱温：30℃；进样量：10 ?L。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定五、操作步骤2、羟甲基糠醛的色谱测定（2）羟甲基糠醛的测定 首先测定七个标准工作溶液在上述色谱条件下的峰面积，以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线，然后测定未知样品，用标准工作曲线对样品进行定量。样品溶液中羟甲基糠醛的响应值应在仪器的线性范围内。在上述色谱条件下，羟甲基糠醛的参考保留时间约为12 min蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定五、操作步骤3、平行试验及空白试验（1）按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。（2）按上述步骤，对10%的甲醇溶液进行测定。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定五、操作步骤4、添加试验 每批样品应至少进行一个样品的添加试验。称取10g试样，精确至0.01g，添加1.0mL羟甲基糠醛标准储备溶液，加9.9 mL甲醇溶解，其他步骤按试样处理步骤进行。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定六、结果计算X=?式中：x—试样中羟甲基糠醛含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；C—从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（?g/mL）；V—定容体积，单位为毫升（mL）；m—样液所代表试样的质量，单位为克（g）。 计算结果保留2位有效数字。在重复性条件下，蜂蜜中羟甲基糠醛的含量在2.0 mg/kg～40 mg/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r)。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定六、结果计算lgr=0.6495lgm-1.3043式中：m—两次测定值的平均值，单位为毫克每千克（mg/kg）。 在再现性条件下，蜂蜜中羟甲基糠醛的含量在2.0 mg/kg～40 mg/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R）。蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定六、结果计算R=0.0682m+0.1243式中：