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白藜芦醇缓解慢性约束应激导致的神经环路损伤及 相关机制研究 摘 要 抑郁症作为21 世纪重大疾病，越来越受到人们的重视。但是抑郁症的发病 机制依旧不明晰。越来越多的证据表明，前额叶皮层、海马和杏仁核脑区组成的 神经环路功能紊乱是抑郁症的发病原因之一。目前，临床上的主流药物存在疗效 慢、副作用强，治疗时间长等明显缺陷。探索新的治疗靶点并开展有效的药物研 发已经刻不容缓。 众多实验证据表明，白藜芦醇具有良好的抗抑郁潜能。为探索白藜芦醇抗抑郁疗效 以及相关作用机制，本研究使用Thy1-YFP-H 转基因小鼠，采用慢性约束应激的方式 构建抑郁症动物模型。采用蔗糖偏好实验（SPT）、悬尾实验（TST ）、新奇抑制摄 食实验（NSFT ）和强迫游泳实验（FST ）行为学实验来评价抑郁症模型的构建。使 用共聚焦显微镜获取的单维和三维图像，结合ImageJ 和Imaris 软件，统计分析海马 和前额叶皮层锥体神经元树突和树突棘及其类型密度的变化，用免疫荧光染色分析 α5GABA Rs 的分布和密度变化。最后使用Western blot 分析海马和前额叶皮层 A GTPase 的水平，以探讨白藜芦醇抗抑郁的作用机制。 结果显示，与模型组相比，白藜芦醇治疗能够显著增加小鼠蔗糖摄入量、减少 悬尾不动时间、缩短新奇抑制摄食实验潜伏期以及降低强迫游泳实验中静止不动时 间；白藜芦醇治疗后还能够明显提高前额叶皮层和海马CA1 基底区、近胞体区和远 胞体区树突密度；且也提高了海马CA1 锥体神经元三个区域的短粗型树突棘密度； 在前额叶皮层，基底区和近胞体区的丝状伪足型树突棘密度以及远胞体区的短粗型 树突棘密度也增加了。免疫荧光研究显示，在海马和前额叶皮层两个脑区的基底、 胞体、近胞体和远胞体端，白藜芦醇处理可显著缓解慢性应激引起的α5GABA Rs A 的密度的减少，同时也缓解了海马RhoA 和Rac 1 表达水平的增加以及前额叶皮层 Cdc42 表达水平的降低。 我们的结果表明，白藜芦醇可能正是基于其多作用靶点的生物学特性，通过调 节GTPase 信号通路，进而减弱慢性应激诱导的海马和前额叶皮层树突和树突棘的丢 失，同时通过提高海马和前额叶皮层α5GABA Rs 水平，阻止锥体神经元紧张性电 A 导的紊乱，维持相关神经环路结构和功能的完整性，综合性地形成了抗抑郁效应。 关键词：抑郁症；白藜芦醇；树突和树突棘；α5GABA Rs ；GTPase A I 目录 第一章 前言1 1.1 抑郁症概述 1 1.2 抑郁症相关神经环路 1 1.3 抑郁症与树突/树突棘3 1.4 GABA 及其受体与抑郁症4 1.5 白藜芦醇的抗抑郁作用5 1.6 本课题研究内容6 第二章 材料与方法8 2.1 药品试剂8 2.2 小鼠抑郁症模型的建立8 2.2.1 转基因小鼠PCR 鉴定9 2.2.2 模型构建步骤9 2.2.3 小鼠抑郁症建模的评价 10 2.3 小鼠脑组织收集 11 2.4 树突棘的量化测定 11 2.5 Western Blot 分析 14 2.6 免疫荧光 15 第三章 结果16 3.1 白藜芦醇对抑郁症模型小鼠行为学的影响 16 3.1.1 蔗糖偏好实验（SPT） 16 3.1.2 新奇抑制摄食实验（NSFT ） 17 3.1.3 悬尾实验(TST) 17 3.1.4 强迫游泳实验(FST) 18 3.2 白藜芦醇对抑郁症模型小鼠BLA 至海马通路的影响 19 3.2.1 白藜芦醇对海马CA1 树突密度的影响 19