(10.5.1)--10.5林木体细胞杂交.pdfVIP

林木体细胞杂交 白菜 甘蓝 白菜-甘蓝 如何实现呢? 课程要点 1 . 体细胞杂交的定义 2 . 体细胞杂交的优点 3 . 体细胞杂交的原理 4 . 体细胞杂交的方法 5 . 融合细胞的筛选 6 . 体细胞杂交在林木中的应用 体细胞杂交的定义 体细胞杂交（Somatic hybridization ）是指两个或更多个相同或丌同 体细胞通过人工方法融合形成单个细胞的过程。 体细胞杂交的优点 1、克服物种间杂交不亲和、不能受精、胚胎早期败育的障碍。 2 、同种细胞或者种间细胞融合，在创造新细胞，培育新品种 方面意义重大。 3 、克服有性杂交的母系遗传，获得细胞质基因的杂合子，研 究细胞质遗传。 4 、不基因工程的分子技术相比，植物体细胞融合均属细胞水 平上的操作，其操作更加简便易行。 体细胞杂交的原理 体细胞杂交的基本原理：细胞膜的流动性 融合过程中两个细胞膜的变化过程 类脂质分子发生扰动和重排 导致细胞桥的形成 细胞质、核相互融合 体细胞杂交的关键技术 （一）融合材料的获得 果胶酶、纤维素酶等破坏胞间层和细胞 的纤维素外壁 ，得到游离的裸露原生质体。 体细胞杂交的关键技术 （二）细胞融合的方法 物理法：显微操作、电场刺激( 电融合法) 。 化学法：聚乙二醇（PEG ）诱导、高 Ca 2 + 和pH 诱导、高Ca 2 + 和pH 结合PEG 诱导、盐类离子（Na NO 3 、 Ca ( NO 3 ) 2 、Ca Cl 2 ）。 生物法：有仙台病毒( H VJ)法。 1 物理法--电融合诱导法 (1) 基本原理 在直流电脉冲的诱导下 ，膜两侧氧化 还原电位发生改变 ，产生电势 ，细胞膜 变薄 ，形成膜穿孔 ，使异种细胞黏合 ， 质膜瞬间破裂并开始连接 ，直到闭合成 完整的膜融合体。 甜菜原生质体电融合过程 A ）在高频电流电场下的相互接触 B ）脉冲刺激后30 s C) 50 秒后 D ）1 . 5 分钟后 E ）6 分钟后 F ）15分钟后 ，原生质体融合完成 2 生物法 各种病毒都具有凝集细胞的能力 ， 它们可以同时粘接在两个细胞表面 ， 使两个细胞靠近并发生凝结。 原理与过程  灭活后的病毒颗粒结合到细胞表面。  病毒表面含有的糖蛋白和一些酶不细胞的细 胞膜上的糖蛋白发生作用 ，使细胞互相凝聚 ， 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布 ， 细胞膜打开 ，细胞发生融合。  融合细胞变圆 ，融合结束。 3 化学法 盐离子诱导： 盐类离子能中和细胞表面的负电荷 ，使凝聚细胞的质膜紧密接触 ， 促进细胞融合。 异核体形成频率低 ，0.1-4%。 PEG诱导： 多聚化合物PEG与溶液中自由水结合 ，高度脱水后引起细胞凝聚、