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2．无菌技术 ;三、分解纤维素的微生物的分离;微生物的应用 ;2.微生物的营养物质及功能;[知识拓展](1)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。 (2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳源，又是氮源、能源。 (3)有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。 (4)病毒是一类完全寄生的生物，它不能在一般的培养基中生长繁殖，必须在活体培养基中才能表现出生命活性。;3．培养基的种类及用途;[知识拓展]培养基的配制原则 (1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。 (2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 (3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。;4．无菌技术 (1)消毒和灭菌的区别;1．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是(　　) ①化学消毒　②灼烧灭菌　③干热灭菌 ④紫外线灭菌　⑤高压蒸汽灭菌　⑥巴氏消毒法 A．⑤③②①④⑥　　　　　B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤ 解析：培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。 答案：A;2．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题： (1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。 (2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 ________。 (3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于________中培养，培养的温度设定在37 ℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。 (4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越________。;解析：本题主要考查了微生物的培养与分离知识。培养基中含有蛋白胨主要提供氮源，淀粉主要提供碳源；还需要水及无机盐等；培养基进行高压蒸汽灭菌后，还要检验灭菌效果；用选择培养基可以将耐盐细菌分离出来。 答案：(1)氮源(碳源不作要求)　碳源　无机盐　水 (2)高压蒸汽灭菌　(3)恒温培养箱　无菌水 (4)多　大　(5)盐(或NaCl)　选择培养基;　细菌的分离与计数;②间接计数法(活菌计数法) a．原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 b．操作 i．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 ii.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 c．计算公式：每克样品中的菌株数＝×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 (3)细菌分离与计数的实验流程 土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并记录结果→细菌计数;第14页/共34页;(3)土壤中纤维素分解菌的筛选 ①方案 土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。 ②选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 ③涉及到的微生物技术主要有：培养基的配制、无菌操作技术、稀释涂布平板法、选择培养基的作用、土壤取样等。 ;3．分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是(　　) A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 B．富集培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少 C．经稀释培养后，用刚果红染色 D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上 解析：经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物。 答案：A;4．如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题：; (2009年高考安徽理综)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是(　　) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B．取104、