高中生物人教版高中生物技术实践专题微生物的培养与应用师优课分解尿素的细菌的分离与计数定稿.pptx

导入新课土壤微生物 上一个课题我们已经学习了培养基的配制以及接种技术，现在我们就来学习如何从土壤中将我们需要的微生物进行分离。课题背景尿素分子的立体结构CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3脲酶课题目的1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课前预习检测判断正误1、科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶（ ）2、筛选分解尿素的细菌的培养基上不需要添加尿素（ ）3、只要培养基中有尿素就可以筛选出分解尿素的细菌（ ）4 、稀释涂布平板法既可用于统计活菌数也可用于统计样品中死菌数（ ）5、统计菌落数目也可以用平板划线法（ ）××××一、研究思路(一)筛选菌种 实例：寻找耐高温的DNA聚合酶PCR技术是一种常用的DNA扩增技术，此项技术的自动化，需要使用耐高温的DNA聚合酶，如果请你来找这种耐高温的酶，你会去哪里找？Taq细菌寻找寻找耐高温生物体耐高温环境（热泉、火山口）耐高温的酶筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物， 使耐热的Taq细菌保留下来。油田温泉冰川耐寒微生物耐热微生物分解石油的细菌筛选原则： 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 1:实验室中微生物的筛选原理人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。思考： 1. 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。2、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。加入青霉素的培养基 ——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌（耐盐细菌）不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物【典型例题】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是(　)A.未接种的选择培养基B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C.接种了的选择培养基D.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D（二）统计菌落数目显微镜直接计数法稀释涂布平板法（活菌计数法）1、显微镜直接计数法 每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少?1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）　5A5AB×104缺点：不能区分死菌与活菌1mm优点：能准确统计微生物的实际数目。2、统计菌落数目——稀释涂布平板法思考1：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数在30~300的平板进行计数。思考：菌落数过小过大不用于计数的原因？统计菌落数目成功的关键：恰当的稀释度思考2：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）（ ） A.2.34×108　B.2.34×109C.234　D.23.4B计算公式：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。思考3：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。实例分析1 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 实 例 启 示1：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。2：在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。实例分析2想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异 如此之大，请分析原因可能有哪些？①②想一想：你能通过设