酶工程实验2碱性磷酸酶的反应动力学性质.pdfVIP

• 实验二 酶的反应动力学性 质 • 一、实验目的 • 了解影响酶促反应速度的因素。 • 学习测定米氏常数（ Km ）的原理和方法。 • 二、实验原理 • 碱性磷酸酶在碱性条件下，催化磷酸单酯水解，通过测 定催化反应速度确定酶活力。根据米氏方程 E+S←→ES→E+P 可推导出米氏公式 • υ=υ [s]/(K +[s]) max m 通过测定不同底物浓度 [s] 下的反应速度 υ，可 以确定催化的最大反应速度 υmax和米氏常数 Km 。 • 通过在不同 pH 、温度、激活剂和抑制剂条件下，测定酶 活力，可确定 pH 、温度、激活剂和抑制剂对酶催化作用 的影响。 • 三、实验材料、仪器和试剂 • （一）实验材料与仪器 • 15mL 试管； pH 计；恒温水浴锅；分光光度计；玻 璃 / 石英比色皿；移液枪与移液管。 • （二）主要试剂 • 碱性磷酸酶； PNPP 溶液； 1M Tris-HCl 缓冲液 （pH8.0 、 8.5 、 9.0 、 9.5 、 10.0 ）；二价阳离 子溶液： MgCl