内皮细胞特异性敲除CD38基因在AngII诱导的小鼠高血压及血管重塑中的作用及其机制.pdfVIP

摘要 摘 要 背景与目的： 高血压病是一种以动脉血压 （包括收缩压和舒张压）升高为主要特征，并 伴有心、脑、肾、视网膜等器官发生病变的血管损伤性疾病，是全球心血管疾 病过早死亡的主要原因。因此，寻找有效的降压干预措施以减少高血压相关疾 病的发病率和死亡率具有重要意义。血管的结构和功能异常是各种心血管疾病 的共同病理基础，其中内皮细胞是维持血管稳态的重要屏障。内皮功能障碍所 导致的炎性细胞黏附、氧化应激损伤、血栓等在心血管疾病的发生发展中起重 + 要作用。CD38是一种具有ADPR 环化酶和NAD 水解酶双重酶活性的膜蛋白， CD38 angiotensin Ⅱ 本实验室的前期研究发现， 缺失可以抑制血管紧张素Ⅱ （ ， AngⅡ）诱导的血压升高、血管重塑和心肌肥大，而内皮细胞在这些疾病中的作 用及其机制还有待深入探讨。因此本课题拟利用内皮细胞特异性CD38敲除小鼠 制备高血压模型，评价内皮细胞CD38基因缺失对AngII 诱导的高血压及血管重 humanumbilicalvein endothelialcell 塑的影响，并利用原代人脐静脉内皮细胞 （ ， HUVECs）敲减CD38基因后制备高血压内皮细胞损伤模型以分析其具体作用机 CD38 AngII 制。本课题旨在从整体动物、细胞及分子水平阐明 对 诱导内皮细胞 功能改变介导血压升高及血管损伤的影响及其机制，以期为高血压病的防治提 供实验依据。 实验方法： 1. 内皮细胞特异性CD38 敲除小鼠的制备及基因型鉴定：将CD38flox/flox 小 鼠与血管内皮细胞特异性Cdh5cre 小鼠交配，得到血管内皮细胞特异性CD38敲 fl/fl cre 除小鼠CD38 Cdh5 ，并通过鼠尾提取DNA 对小鼠的基因型进行鉴定。 2. AngII 1 8-12 CD38flox/flox 诱导小鼠高血压模型的制备及分析：）利用 周龄的 fl/fl cre CD38 Cdh5 12 和 的雄性小鼠各 只，在小鼠肩胛处皮下植入微型渗透泵，注 射AngII （1500ng/kg/min），持续给药4 周以制备高血压模型，尾套法每周监测 0 4 2 血压，第 、 周利用小动物超声仪检测小鼠心功能； ）造模结束后取小鼠胸 主动脉组织制备石蜡切片，采用HE EVG 染色检测血管中膜的厚度；制备冰 II 摘要 冻切片经DHE 染色检测血管组织中的ROS含量；3）心脏组织HE Masson 4 5 天狼猩红染色检测心脏组织的纤维化情况； ）眼球取血检测肝、肾功能； ） 肾脏组织PAS 染色检测肾小球基底膜的病理损伤情况，Western Blot 和Q-PCR 分别检测炎症相关基因如ICAM1、caspase-1、NLRP3 的蛋白表达和基因如TNF-α、 MCP-1 mRNA 的 表