儿茶素对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及加工条件对其活性的影响研究.pdfVIP

摘要 摘 要 xanthine oxidase XO 黄嘌呤氧化酶 （ ， ）主要存在于人体的肝脏及肾脏中， O − 可连续氧化次黄嘌呤和黄嘌呤生成尿酸，催化过程中还伴随着超氧阴离子（ ） 2 和过氧化物的形成。血液中尿酸水平持续过高会诱发高尿酸血症，严重时过饱 和的尿酸会沉淀成钠盐并沉积在外周关节和组织中，最终导致痛风，同时还面 临着发生高脂血症、高血压、糖尿病和动脉粥样硬化等并发症的风险。近年来， 高嘌呤食物逐渐受到人们的喜爱，痛风的发病率也因此迅速升高，成为一种多 发且严重的代谢性疾病。目前市面上常见的降尿酸类药物如别嘌呤醇和非布索 坦等，已被报道具有发热、过敏、腹泻以及肝肾损伤等副作用，因此，发掘活 性高且安全无毒的XO抑制剂具有重要的现实意义。儿茶素类物质作为茶叶中重 要的活性组分，因其具有抗氧化、抗炎、抗癌及降血脂等良好的药理活性，已 成为研发抗糖尿病、抗高血糖及抗高尿酸血症等药物和功能食品的重要资源。 本论文选取了三种代表性的儿茶素：表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、 GCG ECG 没食子儿茶素没食子酸酯 （ ）和表儿茶素没食子酸酯 （ ），通过多种 光谱学方法及计算机模拟技术系统地探究了上述三种儿茶素对XO 的抑制作用 和分子机制、与XO 的结合性质以及对酶构象的影响。探讨了三种儿茶素对XO O − 催化体系中 形成的抑制作用方式，并基于剂量归一化等效线理论研究了它们 2 pH ECG 与别嘌呤醇的联合抑制效果。此外，还研究了 值、加热和微波预处理对 抗氧化性和对XO抑制活性的影响，并建立体外模拟消化模型，测定了ECG 的 生物可及性，主要研究结果如下： 1. EGCG GCG ECG XO 、 和 都具有良好的抑制 活性的能力，其半抑制浓 度 （IC ）值分别为40.50± 0.32 μM、33.60± 0.53 μM 和19.33± 0.45 μM，抑制 50 能力强弱顺序为ECG GCG EGCG。三种儿茶素对XO 的抑制类型均为可逆 EGCG GCG ECG 6.68± 0.04 μM 5.10 的混合型抑制， 、 和 的抑制常数值分别为 、 ± 0.13 μM 及5.27± 0.24 μM，表观系数α均大于1，表明三种儿茶素更倾向于与 游离酶结合。 2. 三种儿茶素都能够显著猝灭XO 的内源荧光，猝灭机制为单一静态型； 4 −1 室温下的结合常数均在 10 Lmol 数量级，表明三种儿茶素与XO 之间具有中 I 摘要 等强度的结合亲和力，其中GCG 结合的最为稳定；结合位点数均为1，表明XO 中仅有一个或一类供儿茶素结合的位点；三种儿茶素与XO 的结合均通过氢键和 范德华力驱动。分子模拟结果显示三种儿茶素都插入到黄素腺嘌呤二核苷酸 （FAD）附近的柔性区域，与周围的氨基酸残基通过氢键形成复合物，结合后儿 茶素的构象发生扭曲。MM−PBSA 自由能分解的结果表明极性溶剂化自由能对 总自由能贡献最大。分子动力学结果表明三种儿茶素的存在会导致XO 的结构紧