色谱分析法导论吴丽荣.ppt

§8-3 定性和定量分析方法 一、定性分析 1.与标样对照的方法 2.与其它分析仪器联用的定性方法 二、定量分析 1.定量校正因子 2.定量方法 1）归一化法；2）内标法； 3）外标法 定性分析方法 与标品 对照 利用 峰高增量 定性 利用r2,1定性 利用tR定性 利用 双色谱系统 定性 1 利用保留值及其规律定性 各物质在一定的色谱条件下均有确定不变的保留值，因此保留值可作为定性指标。 （1）利用绝对保留值定性（标准物对照法） 在相同色谱条件下，分别测得待测物与标准物的保留值。若相同，则可以初步认为可能是同一种物质；若不同，则肯定不是同一种物质。 要求：同台仪器；操作条件稳定一致；有样品的标准物 （2）用相对保留值定性 根据文献，相同色谱条件、相同对照品，测得对照品和待测样品的相对保留值： i-未知组分； s-对照品。 并与文献值比较，若二者相同，则可认为是同一物质。 可消除操作条件的差异 适用于无已知物或组分比较简单的已知范围的混合物试样。 S （3）用已知物增加峰高法定性 先测未知样品的色谱图 再在同样的色谱条件下测加纯物质的未知样品的色谱图。 对比两张色谱图，哪个峰变高了，则该组分可能是所加的纯物质。 这是在确认某一复杂样品中是否含有某物质的最好办法。 二、 定量分析方法 定量依据：检测器对组分产生的响应信号与组分的量成正比，即 死体积V0 不能被固定相滞留的组分从进样到出现峰最大值所消耗的流动相的体积。亦即从进样器到检测器的流路中未被固定相占有的空隙的总体积。 V0 = t0 ×F0(F0为载气流速,单位：m L / min) 死时间相当于载气充满死体积所需的时间。死体积大，色谱峰扩张(展宽)，柱效降低。 保留体积VR 是指组分从进样开始到出现峰最大值时所需流动相的体积。 VR = tR?F0 (F0为载气流速) 调整保留体积VR VR = tR?F0 它真实地反应将待测组分从固定相中携带出柱子所需流动相体积。 tR和VR——定性参数。 总结： 利用色谱图可以解决下列问题： （1） 样品中所含组分的最少个数 （2） 保留值---定性 （3） 色谱峰面积（或峰高）---定量 （4） 色谱峰的区域宽度---评价柱效 4.分配系数K和分配比k 4.1 分配系数K 在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度比，称为分配系数（平衡常数），用K表示，即： 组分在固定相中的浓度 组分在流动相中的浓度 K= cS cm = K与柱温有关，与两相体积无关。 分配系数 K的讨论 一定温度下，组分的分配系数K越大，保留值越?，出峰越?； 若两组分的K值相等，则同时出峰 各组分的K值不同是分离的基础； 某组分不被固定相保留，则K=? 组分在固定相中的浓度 组分在流动相中的浓度 K= cS cm = （大,慢） （0） 4.2 容量因子(k’)——分配比 在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量之比，称为分配比（容量因子、容量比） 补充： tR、VR与K、k的关系 操作条件一定时，K或k越大，保留值越大 若K或k相等，则两组分的色谱峰重合 K或k不等是色谱分离的先决条件 §8-2 色谱分析法基本理论 一、塔板理论 二、速率理论 三、色谱分离总效能的衡量 一、 塔板理论 分馏的原理是通过加热， 从塔底形成的上升蒸气流 和从塔顶冷凝的下降液体 流（回流），在塔板液层 上进行气液两相的热交换 和质交换，依据组分的挥 发度不同，轻组分随蒸气 流向上，重组分随液体流 向下，从而完成液体混合 物的分离目的。 一、 塔板理论 该理论是把色谱柱比作一个分馏塔，从而把色谱分离过程比作分馏过程。 色谱柱内有很多层分隔的塔板，在每一层塔 板上，组分可达到一次分配平衡。因被分离组分 的分配系数不同，经多次分配平衡后，K小的组 分先流出色谱柱。 只要色谱柱的塔板足够多，组分的K值仅有微小的差别，也可得到较好的分离。 色谱柱长：L 虚拟的每次分配平衡所需的塔板高度：H 色谱柱的理论塔板数：n 则三者的关系为： n = L / H 理论塔板数的计算公式： 注意：单位统一！ 有效塔板数( neff)和有效塔板高度(Heff)  n或neff 、H或Heff ——描述柱效能的重要指标 对于单一组分，n或neff越大（H或Heff越小）， 柱效能越高，色谱峰越窄。 注意：单位统一！ 练习1 在一根长3m的色谱柱上分离一样品，得下列数据：空气、组分