酶热生物传感技术及其乳品安全的快速分析课件.pptxVIP

S C A N D I N A V I A N E X C E L L E N C EF R O M L U N D U N I V E R S I T YEnzyme Thermistor -酶热生物传感技术及其乳品平安的快速分析谢斌瑞典Lund大学纯与应用生物化学系武汉 2021.03酶抗体微生物细胞电活性物质 电极 pH变化pH电极热量 热敏电阻光 光敏元件质量变化 压电晶体什么是生物传感器?电信号分子识别信号传感生物传感器原理生物量热 – 一种万能的生物分析平台生物反响中的热量变化是一种常见形式 酶-底物催化的特异性生物反响产生足够的热量测量系统对光、 浊度、电等不敏感 采用差分量热，环境温度变化影响小极高的分析精度〔10-5 ℃)适合于有机相热敏传感器无需校正样品〔如，血液、奶等〕一无需预处理，可直接进样分析采用流动注射分析，检测快速、本钱低 〔约1元人民币/样品〕可连续、在线分析样品热敏电阻热酶电阻酶流动管酶Peltier器件样品酶热敏电阻(a) 静态分析(b) 静态或流动分析(c) 流动分析早期设计酶热生物分析系统进样管路数据处理进样阀固相酶柱信号放大流动泵缓冲载液酶热传感器酶热生物分析仪生物固相固态外表固相及摧化反响酶热生物传感原理ΔH· nρTmTrΔT = PSCγCΔT = Tm - TrCγ : 反响器热容量S : 底物ΔH : 反响中热焓的变化nρ : 反响物摩尔数P : 产物酶催化热焓变化● 多数酶催化反响为放热反响, ΔH 0- ΔH=-100 kJ/mol 为典型的过氧化物酶和氧化酶的热 焓，其它酶在同一数量级 氧化酶可与过氧化物酶共同固相 - ΔH变化叠加，增加热信号 - 消除过氧化氢危害，稳定了酶活性 - 产生额外的 50% 氧● Tris 缓冲液能加大质子热焓，从而对如，蛋白酶等增加约-47 kJ/mol的热量 传感装置参数流速: 0.5-2 ml/mL样品量: 0.01-1 mL测量时间: 1-6 min酶柱容量: 0.2-1 mL固相酶量: 50 units/柱固相材料: CPG, 传感器: 热敏电阻传感器酶柱进样样品环：50 - 500 μL 酶柱内径〔I.D〕: 1-2 mm 酶柱容量：0.5 to 1mL 固定化酶 方法〔戊二醛共价交联〕可控多孔(120-160 nm)玻璃珠 (CPG): 琼脂糖凝胶:CL-6B网状玻化碳 〔RVC〕 溶胶凝胶固定化细胞方法钙果胶凝胶海藻酸钙凝胶细胞嵌入琼脂糖颗粒酶热生物传感电极酶柱装载电极置位 检测条件设置检测响应信号性能特点 是一种万能的生物分析平台。原理上只要存在相应的酶，就能对其底物进行特异的检测?传感器与流动样品隔离，不受光，电和化合物的直接 干扰，无需经常校正 ?无需对待测样品，如全血、发酵液、奶等进行预处理，可直接进样分析?可进行现场的连续、在线分析，如发酵过程检测和血糖动态监测?可实现多分析物的同步检测和分析?酶柱可反复使用数百次，检测本钱低，并易于更换?测量快速〔约1-5分钟/样品〕，操作简便，可实现自动检测分析?已实现商品化和系列产品，并能根据用户的特殊要求打造?除酶分析外，还可用于细胞、微生物、酵母、ATP等分析?应用领域● 临床分析，如糖尿病● 发酵过程监测， 如青霉素发酵● 食品平安检测分析，如乳品中非法添加剂青霉素、 β-内酰胺酶等● 环境污染分析，如持续有机污染物氯酚、重金属、 农药残留物等● 生物分析中，如酶分析、免疫分析、细胞分析、微 生物分析、DNA分析等● 远程健康监测 已检测的分析物实例乳品平安快速检测分析牛奶非法添加剂Illegal addition of β-lactamase was discovered in China, in 2007. According to the report, β-lactamase activity was found in 49 out of 77 individually packed milk samples collected from 5 retail stores in 3 cities. Some of these samples had extremely high β-lactamase activity.The ministry of health of the People’s Republic of China included β-lactamase into its newly published “black list〞 of illegal food additives.β-内酰胺酶检测Me