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ADDIN CNKISM.UserStyle双水相萃取技术应用进展 【摘要】双水相萃取技术是一种高效温和的绿色分离技术，可以替代传统的有机相-水相的溶剂萃取技术，因其适用于提取生物活性物质如 \t /item/%E5%8F%8C%E6%B0%B4%E7%9B%B8%E8%90%83%E5%8F%96/_blank 水溶性的蛋白质、酶等并且不易引起失活，因而广泛应用于生物分离工程、金属离子分离、食品化工和药物化学分析等领域，有广阔的发展空间。本文简要介绍了双水相萃取技术的工作原理，分析了双水相萃取技术要点，总结了国内外双水相萃取技术的进展。 【关键词】双水相萃取技术，有机溶剂，无机盐，分离，提纯 双水相萃取（Aqueous two-phase extraction，简称APTE）又称双水相分配，最早于20世纪60年代被瑞典伦德大学Albertsson成功应用在分离生物分子——叶绿素上[1]，而后先后被用于蛋白质、酶、核酸、抗生素、中药等生物活性物质的分离和提纯中[2]。该技术能解决蛋白质变性和沉淀的问题，极具发展前景，因而备受瞩目，广泛应用于细胞生物学、生物分离工程、药物化学、食品化工、金属离子分离等[3,4,5]。 1. 双水相萃取技术原理 有机物的憎水程度有所差异，并且分子之间存在空间阻碍、存在分子间作用力、电荷作用、力的作用（范德华力、憎水键、离子键和氢键），因此当亲水性有机物在水中以适当浓度或适当温度混合时，不同浓度的亲水性聚合物不能相互渗透，发生分相后形成双水相体系，由于不同的组分的密度不同，会发生分层现象，因而可以对不同的组分进行分离。其中，有机物/盐双水相体系是指两种水溶性高分子有机物或一种水溶性高分子有机物和一种盐或多种盐类以一定浓度在水中混合时，由于盐的盐析作用，形成两层互不相溶的水相[2,5,6,7]。 在双水相萃取过程中，物质在上下相中目标物质的浓度不同，定义上相中浓度与下相中浓度之比为分配系数。(即分配系数K不同)。因而双水相体系对各类蛋白质的分配具有较好的选择性。影响分配系数的因素有很多，聚合物的分子量、浓度、添加剂( 如盐的种类与浓度、有机溶剂、表面活性剂的添加等) 、p H值、温度、疏水基团以及亲和配基等都能从各个方面影响双水相萃取的分配技术。 双水相萃取从采用高分子有机物开始，随着研究深入，近年来采用小分子的无机盐或者有机溶剂的双水相萃取技术也很常见。能形成双水相体系的有机物非常多，聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇、聚丙二醇、甲基纤维素、葡聚糖、糊精、变性淀粉、阿拉伯树胶、羟丙基葡聚糖等。根据下相的物质不同，双水相体系可分为高聚物/高聚物/水体系和高聚物/盐/水体系。前者上下相都富含高聚物，可保护生物分子活性，且界面吸附少，后者上相富含高聚物，下相富含盐，且与前者相比，成本相对较低，粘度小，易于工业应用[6,7]，前者中最常见的就是聚乙二醇/葡萄糖，后者中常见聚乙二醇/无机盐（硫酸盐、磷酸盐等）[8]。 较为常见的有机物/盐双水相体系有：①聚合物：聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇，盐：硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、磷酸钾、磷酸钠②聚合物：聚丙二醇，盐：磷酸钾、磷酸二氢钾③聚合物：葡聚糖或羟丙基葡聚糖，盐：甲酸钠④聚合物甲基纤维素或聚乙烯醇，盐：酒石酸钾钠[7]。 虽然双水相萃取原理与一般萃取原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配原理，不同之处在于萃取体系的性质差异[5]，但是双水相萃取具有更多的优势，因而可以替代传统的有机物-水相萃取技术。双水相萃取技术具有以下优点[2,9,10]。 （1）双水相萃取技术对水溶性蛋白质、酶、核酸等生物活性物质更友好。双水相萃取通常是条件温和的常温常压下进行，含水量高，因此不会引起生物活性物质失活、变性，产品的收率高、纯度高各种参数可按比例放大而产物收率并不降低。 （2）双水相萃取工艺流程快，该过程传质速度快，分相时间短，效率高。 （3）双水相萃取工艺流程简单，分离步骤少，通用性强，可以用于分离多种有机物，易于连续操作，设备简单，故易于放大，并且放大后产率高，易于进行大规模生产。 （4）双水相萃取技术不存在有机溶剂残留。 （5）在两相中目标物质的分配平衡受多种因素的影响[7]，可选择合理的条件提高分配平衡的选择性和回收率。主要影响因素有聚合物分子量及其浓度的影响，体系pH值，离子环境（盐的种类及浓度），和温度[6]。 2 双水相萃取技术研究 国外对双水相萃取技术的研究较为领先，相关英文文献数目众多，采用聚合物-盐型相体系的研究占比较多。C.Anandharamakrishnan等人（2005年），用双水相萃取技术纯化和浓缩干酪乳清蛋白，采用聚合物-聚合物型和聚合物-盐型系统的双水相萃取技术（ATPE）从奶酪乳清中回收蛋白质（无脂肪），后者能选择性地将蛋白质分配到顶部（富含聚合物）相