三章酶的分离纯化.pptxVIP

三章酶的分离纯化第1页/共77页第2页/共77页本章重点各种分离方法的操作原理分离方法的应用原则酶分离纯化中应注意的问题第3页/共77页酶制剂的来源第4页/共77页3.1酶纯化的必要性3.2起始材料的选择3.3 酶的萃取3.4分离方法3.5酶纯化步骤的设计3.6纯化步骤的定量评价3.7在纯化过程中酶活力的损失第5页/共77页3.1酶纯化的必要性生物细胞中同时存在多种多样的酶。酶在生物细胞中的分布并不是均一的。许多酶可能作用于同一个底物。某种酶的纯化程度根据研究目的而定。第6页/共77页3.2 起始材料的选择不顾及酶的来源时，可选择酶含量高的材料。微生物培养物注意材料的年龄注意在生物体内的富集区域第7页/共77页3.3 酶的萃取（处理液应及时处理，否则在均浆上加一薄层甲苯可以防止微生物感染。）（1）膜和细胞壁的破碎：研磨、超声波、高压（注意胞外酶的测定）（2）酶的萃取：萃取液3倍于起始材料 缓冲液(pH 7.5)的作用，中和从空泡中放出的大量酸；高离子强度(0.1-0.5)有助于将酶从结合的膜上解析下来；丙酮粉有助于将酶与脂肪或磷脂膜分离。注意事项：蛋白酶的抑制方法（低温快速、抑制剂） 制备丙酮粉用以解除酶与脂肪或磷脂膜的结合。除去核酸：调整pH沉淀（鱼精蛋白硫酸盐或链霉素）、水解第8页/共77页3.4 酶的分离方法（1）以大小或质量为依据：离心（300000g)、凝胶过滤（Se