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白细胞血型（HLA）法医学 HLA的命名、遗传、应用、抗原在体内的分布、测定I类抗原的试验名称、原理， NIH技术HLA抗原的结构、HLA抗体的来源、特性及交叉反应，DNA分型方法。掌 握了 解要 求 一、MHC与HLA第一节 概 述红细胞血型抗原白细胞特有抗原与其它组织共有抗原：HLA人类白细胞膜上的抗原 1HLA又称移植抗原、组织相容性抗原.2基因群 MHC主要组织相容性复合体人类的MHC称为HLA系统 Ⅱ类抗原： D、DR、DP、DQⅠ类抗原： A、B、C人类组织相容性抗原分七个座位人类组织相容性抗原 小鼠肿瘤移植排斥，多次输血病人体内及经产妇体内有抗体，发现白细胞抗原存在多数组织中，微量淋巴细胞毒试验，国际专题讨论会，分子生物学研究。二. 研究简史 三、抗原结构与细胞分布45kd，由MHC编码，有5个结构域：α1、α2有多态性，α3与β2m以非共价键连接，α4越膜部分，α5在胞浆内。可溶性抗原即位于胞膜外部分。即β2m (β2微球蛋白)，12kd，基因在第15号染色体，影响重链表现出抗原性。Ⅰ类抗原：A、B、C抗原β链（轻链）α链（重链） Ⅱ类抗原：DR、DP、DQ三、抗原结构与细胞分布α链、β链均为重链，非共价键连接，由MHC编码，二条链各有4个结构域，多态性主要由α1、β1结构域决定。 人体分布Ⅰ类Ag几乎所有有核细胞膜上，淋巴细胞密度最高。以可溶性形式存在血浆、体液中。成熟红细胞无，血小板有。Ⅱ类Ag免疫活性细胞上：树突状细胞、单核细胞、B细胞。精 子Ⅰ、Ⅱ类Ag都有，且以单倍型形式表达。 1妊娠6周2（月经期、排卵期）可能与激素有关。3与细胞膜代谢有关。发育和变异发育早4药物、疾病，如肿瘤。主要表现为抗原与抗体反应减弱，或可逆性丧失。 5使蛋白质变性的因素都会使HLA抗原发生不可逆的变化生理周期献血员病 理理化性质变 异6 大写英文字母：A、B 、C、D、DR、DP、DQ第二节 命名阿拉伯数字：1、2 、 3……A、B座位数字不重叠；C座位，Cw为与补体区分； D、DP座位，Dw、DPw为用细胞学方法测定。HLA-A*0201（A座位，A2抗原，1号亚型基因）~A*0210（10号亚型基因）HLA-A23(9)：9为宽特异性，23为窄特异性 抗原座位每一座位特异性等位基因命名似血清学命名大写英文字母：A、B 、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大写英文字母：A、B 、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大写英文字母：A、B 、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大写英文字母：A、B 、C、D、DR、DP、DQ抗原座位 第三节 遗传一、基因定位及结构Ⅰ类Ⅱ类Ⅲ类基因区基因区基因区 主要编码A、B、C 抗原的α链18个外显子和7个内含子2多态性主要由外显子2和3决定3Ⅰ类基因区 主要编码DR、DP、DQ的α、β链DRA有3个等位基因，DRB有9个基因位点6个外显子和5个内含子多态性主要由外显子2决定Ⅱ类基因区 二、遗传特征 共显性遗传特异性单倍型遗传重组连锁不平衡基因单位点遗传 一个座位最多检出二个抗原。A2，A-：表示为A2纯合子或A2和一个空白抗原或A2和一个至今尚未发现的抗原。遗传特征1. 共 显 性 遗 传 遗传特征⒉ 各座位特异性连锁成单倍型遗传。 表型：A9,A11；B5,B13基因型：A9,A11；B5,B13单倍型：A11,B5, /A9,B13； A11,B13, /A9,B5同胞间关系:1/4全相同, 1/4全不同,1/2半相同 ⒊ 重 组遗传特征A、B座位间重组率0.87%。 单倍型频率等于组成基因频率的乘积，但有些单倍型观察频率高于或低于期望频率。A2频率0.3，B46频率0.05，A2,B46预期频率0.015，但实际观察值0.04。因此计算亲权指数时要用单倍型频率。遗传特征⒋ 连锁不平衡 遗传特征⒌ 基因单位点遗传父HLA-DRB1*0401纯合子母HLA-DRB1*0302纯合子子为此两基因杂合子 HLA群体分布不同人群HLA抗原分布差异大，提供某些人类迁移和混杂信息。 第四节 分型一、血清学分型二、细胞学分型(D、DP抗原分型)三、 DNA分型 一、血清学分型1、A、B、C抗原分型2、DR、DQ抗原分型 微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理微量淋巴细胞毒实验步骤1、A、B、C抗原分型 抗体+相应抗原+补体——细胞膜受损，着色，估计死细胞占全部细胞的%，判定抗原。微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理 制备淋巴细胞悬液，多用外周血，通过密度梯度离心法取得淋巴细胞，调细胞数2000个/ul1ul抗原+1ul抗体→(30min、20～25℃)+5ul补体（兔血清）→(60min、20～25℃)+3ul伊红→(5～8min)+8ul甲醛→(过夜)低倍镜观察、判读结果。微量淋巴细