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分子诊断基因治疗第1页/共41页第2页/共41页随着50年代DNA双螺旋结构的发现，有关人类遗传物质，基因的研究进入了分子时代。肿瘤基因和病毒基因研究的新发现，特别是细胞分子生物学基础理论和技术方法出现了革命性的创新并日益完善成熟，使人类生物医学进入了分子水平时代。病理学的发展也不例外，将病理学这门有着悠久历史的学科推进到分子水平，逐步形成了分子病理学。病理学诊断也由以形态学观察为基础逐步进入分子水平，既分子诊断 第3页/共41页分子病理学： 应用细胞分子生物学的理论和技术方法，对人类疾病发生发展、发病原因、机制、疾病的形态变化从分子or基因水平加以认识。 病理学诊断也由以形态学观察为基础逐步进入分子水平，既分子诊断—以探查基因的变化来达到诊断疾病的目的。第4页/共41页分子诊断的特点： 灵敏度高：基因虽然微量，难以检测，但目前已有使用基因or其片段高度扩增的PCR技术，以及应用高灵敏度的基因探针，即可探测。 特异性强：基因诊断检测的目标是基因，不同的基因的碱基序列各不相同，检测基因的分子生物学方法亦是高度特异性的。 适用范围广。第5页/共41页目前主要应用于： 人类遗传病的基因诊断or产前诊断；肿瘤； 感染性疾病病原体（细菌，病毒）； 多基因病；组织器官移植配型； 法医学—个人识别（个人特异性的DNA指纹图）； 亲子鉴定。 其中肿瘤的分子诊断涉及到，多种恶性肿瘤、癌前病变。 诊断的基因涉及多种癌基因，抑癌基因及相关基因。 第6页/共41页二 分子诊断在肿瘤研究中的意义和应用1 肿瘤易感基因的检测： 肿瘤分子遗传学研究发现，部分肿瘤的发生具有 遗传学基础，故肿瘤遗传相关的易感基因检测对 于肿瘤高危人群的筛测具有实用价值。 已明确的肿瘤易感基因及相关肿瘤有： 第7页/共41页Rb1-视网膜母细胞瘤，为抑癌基因，定位于13q14.1 染色体, 基因产物位于细胞核。 APC-家族性腺瘤性息肉病，该基因定位于5q21染色体, 基因产物位于细胞膜，功能不清。WT1-肾母细胞瘤，该基因定位于11p13染色体, 基因产 物位于细胞核。BRCA1-乳腺癌，卵巢癌等，该基因定位于17q21染色体, 基因产物位于细胞核，为核内磷酸化蛋白与激素信 号传导有关。 第8页/共41页抑癌基因与相关肿瘤抑癌 染色体 基因产 遗传性肿瘤 散发性肿瘤基因 定位 物定位Rb 13q14核内 视网膜母细胞瘤 视网膜母细胞瘤 膀胱癌 乳癌 食道癌 肺癌P53 17p13核内 膀胱癌 乳腺癌 食道癌 肺癌 肝癌 卵巢癌 淋巴瘤DCC 18q12胞膜 结肠癌 直肠癌APC 5q21胞浆 家族性多发性腺瘤 结肠癌 直肠癌 胃癌 胰腺癌WT1 11p13核内Wilm’s瘤Wilm’s瘤P16 9q21核内 黑色素瘤 黑色素瘤 膀胱癌 乳腺癌 肺癌 肾癌 卵巢癌BRCA1 17q21胞浆 乳腺癌 卵巢癌 乳腺癌 卵巢癌 结肠癌 直肠癌 前列腺癌第9页/共41页二 分子诊断在肿瘤研究中的意义和应用2 肿瘤的分类： 对BCR区基因重排的检测，可对慢性粒细胞性白学病进行诊断，该基因定位于22q染色体, 该基因称为断裂点群区域基因，9q上的AB1基因与22q34.36区域基因序列相融合。 对N-myc和C-myc的扩增和表达检测，对鉴别神经母细胞瘤和神经上皮瘤具有应用价值。N-myc明显扩增和过度表达--神经母细胞瘤。C-myc的扩增和过度表达--神经上皮细胞瘤。 第10页/共41页二 分子诊断在肿瘤研究中的意义和应用3 肿瘤的早期诊断： K-Ras基因突变，在胰腺癌，结肠癌，肺癌中发生率较高，其突变点在第12编码子最常见。应用针吸活检检测胰腺癌中第12编码子突变，检出率达100%。 应用PCR-RFLP(限制性酶切片段长度多态性）方法检测了结肠癌患者Ras基因突变达33.3%. 另有学者检测了有Ras基因突变的7例中，1例病人随访4年后发现了结肠癌。 K-Ras基因编码鸟苷酸结合蛋白，与GTPase结合。其突变降低了Ras蛋白与GTPase的结合能力，导致Ras蛋白与GTP的持续结合，从而促进细胞的生长作用。 第11页/共41页二 分子诊断在肿瘤研究中的意义和应用4 肿瘤的预后判断： 肿瘤相关基因的突变，扩增及过表达等改变常与肿瘤的预后密切相关。如，P53基因突变与乳腺癌，肝癌，结肠癌等多种肿瘤预后相关。 P53基因位于17p13，基因产物定位于细胞核，编码393个氨基酸组成的53KD的核内磷酸化蛋白，具有蛋白质-DNA和蛋白质-蛋白质结合的功能，p53是细胞周期中负调节