胰蛋白酶、SDS对三疣梭子蟹酚氧化酶活力的影响[设计+开题+综述].pdfVIP

开题报告 海洋生物资源与环境 胰蛋白酶、SDS对三疣梭子蟹酚氧化酶活力的影响 一、选题的背景与意义 三疣梭子蟹(Portunns trituberculatus)属甲壳纲短尾族梭子蟹科，是著名的大 型海产食用蟹，具有较高的经济价值。该蟹遍布我国沿海，东海、黄渤海产量较 大。近年来，由于海洋渔业资源结构的变化，梭子蟹自然资源急剧衰退，使得其 商品价值倍增，人工养殖迅速兴起。 甲壳类等节肢动物不具有特异性免疫功能，免疫防御是通过非特异性免疫发 挥作用。酚氧化酶原激活系统(prophenoloxidase activating system)是甲壳动物重要 的防御和识别系统，由丝氨酸蛋白酶和其他相关因子组成，类似于脊椎动物补体 系统，在识别异物、释放调理素促进血细胞的吞噬和包囊以及介导凝集和凝固产 生杀菌物质等免疫功能方面发挥重要作用。酚氧化酶(phenoloxidase，PO)是酚氧 化酶原激活系统的产物，是衡量机体免疫功能的重要指标。 已有研究表明甲壳血蓝蛋白在体外条件下不仅可以受十二烷基硫酸钠 (SDS)、胰蛋白酶、尿素等的诱导表现出酚氧化酶活性，而且在一些内源性物质 如血细胞溶解产物、凝集因子等的诱导下亦可显示出酚氧化酶活性， 同时 Perdo-mo 等研究证实美洲龙虾(Panulirus argus)血蓝蛋白在正常机体内具有酚氧 化酶活性。本实验试图分别将胰蛋白酶和十二烷基硫酸钠（SDS ）作用于三疣梭 子蟹的血淋巴及血细胞溶解产物，测定酚氧化酶活力的变动情况。本实验将在这 方面进行初步的探索，为以后的实验打下基础。 二、研究的基本内容与拟解决的主要问题： 基本内容： （1）在三疣梭子蟹第三步足基关节处用玻璃注释器提取淋巴液； （2 ）血浆样品和血细胞溶解产物的制备； （3 ）血淋巴、血细胞酚氧化酶活力的测定； （4 ）数据处理与分析。 拟解决的主要问题： 试图分别将胰蛋白酶和十二烷基硫酸钠（SDS ）作用于三疣梭子蟹的血淋巴 及血细胞溶解产物，测定酚氧化酶活力的变动情况。 三、研究的方法与技术路线： 研究方法：首先准备好实验材料，其次配置和稀释好各种实验试剂，做好实验前 期的准备工作。分好实验梯度，接下来采集血淋巴、血浆样品及血细胞溶解产物 的制备。将配置的不用浓度的试剂作用于获取的样品，测定酚氧化酶的活力变 情况。 技术路线： 购买三疣梭子蟹并喂养 配制实验试剂 样品制备 将试剂作用于样品 测定酚氧化酶的活力变 数据分析、制表 论 文 撰 写 四、研究的总体安排与进度： 2010 年11 月——2010 年12 月 开题 2011 年2 月——2011 年4 月 （1）翻译外文文献； （2 ）完成实验操作； （3 ）数据分析； （4 ）撰写论文。 五、主要参考文献： [1] 王雷, 李光友. 甲壳动物的体液免疫研究进展[J]. 海洋科学,1992, 3: 18-19. [2] 夏栋, 卞疆.龙虾多酚氧化酶的纯化及其部分生化特性[J]. 江苏食品与发酵, 2000,1: 16-19. [3] 赵东海, 张建平, 侯菊花. 蘑菇中多酚氧化酶的酶学特性研究 [J]. 食品与机械, 2004, 20 (5): 12-17. [4] 张明辉, 陆宏达. 中华绒螯蟹血淋巴液抗凝剂的筛选[J]. 水产科技情报, 2005, 32 （增刊）: 93-99. [5] 陆宏达,张明辉.中华绒螯蟹血细胞数及离体后形态学变化[J]. 水产学报, 2006, 30 (4) : 444 - 462.. [6] 孙虎山, 李光友. 栉孔扇贝血淋巴中酚氧化酶和髓过氧物酶活力[J].