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PAGE2 / NUMPAGES2 mRNA 疫苗生产厂房工艺工程设计探索 mRNA 疫苗技术作为最新一代的疫苗制备技术已经实现疫苗生产和临床应用，例如新型冠状病毒肺炎mRNA疫苗(Corona Virus Disease 2019 mRNA vaccine，COVID-19 mRNA vaccine)。和传统的灭活苗、重组亚单位疫苗相比，mRNA 疫苗技术具有效价高、开发周期短、安全性好、生产技术通用性高的特点。由于 mRNA 的特点和工艺特殊性，传统的生物药物设计理念已经不能完全符合其制备要求，如何合理设计mRNA疫苗生产厂房和工艺工程是值得研究的问题。 由于各国的地理位置、人文特点、能源结构、环保要求等都各不相同，因此在借鉴欧美已有的mRNA 疫苗规模化生产设施的基础上，该研究探索了符合我国国情的生产设施和工艺工程设计方案，并以拟定的目标生产规模(每年 10 亿剂次量)进行产能计算及分析，探索了 mRNA 疫苗大规模商业化生产厂房的工艺工程设计要点，阐述并讨论了厂房平面布局、洁净区域划分、人物流走向、压差分布和气流方向等，以期为国内 mRNA 疫苗商业化生产平台的快速落地提供参考。 自 2019 年底 COVID-19 疫情暴发以来，新冠病毒迅速席卷世界各地，给人类健康和全球经济造成了重大损失[1]。在抗击疫情过程中，疫苗无疑是最有力的武器之一。此次新冠疫情的暴发也促成了历史上最快的疫苗研发 [2]。2020 年BioNTech/Pfizer 和 Maderna 的两款新型 mRNA 疫苗在短短 11 个月内完成了从研发到获得美国 FDA 和欧盟的紧急获批，mRNA 疫苗的元年真正到来[3]。mRNA 疫苗是通过合成、转录等工艺制备 mRNA 将外源目的基因序列以特定的递送系统导入机体细胞并表达目的蛋白、刺激机体产生特异性免疫学反应，从而使机体获得免疫保护的一种核酸制剂[4]。 相比于传统疫苗，mRNA 疫苗采用 DNA 模板，通过无细胞酶促转录反应，此生产工艺相对简单，可实现快速批量生产；mRNA疫苗的配方设计和生产过程步骤具有可复制性，可缩短研发周期；在人体内发挥作用时，mRNA本身不进入细胞核，无外源性 DNA 污染的风险，安全性较高[2]。mRNA作为一种具有潜力的候选技术平台，可用作预防性疫苗、治疗性疫苗和治疗性药物[3]。目前国内外公司积极深度布局 mRNA 药物技术路线，截至 2022 年4 月，Moderna、BioNTech 和 CureVac 的已上市和在研管线共 43 个[5]，截至 2022年 6 月，国内在研 mRNA 疫苗的企业超过 10 家，其中艾博生物的 ARCoVax 和丽凡达生物(艾美疫苗)的 LVRNA009 已进入Ⅲ期临床[6-7]，斯微生物的 DF104B1 已进入Ⅱ期临床，锐博生物、康希诺和石药等也均获批进入临床试验[8]。 新型药物疗法的发展与成熟离不开新的工艺和生产解决方案的支持。本研究根据 mRNA 疫苗产业化生产工艺相对稳定的特点，以及相关法规要求，探索厂房工艺设计，给出参考方案，并对该方案的功能区布局、洁净区域划分、人物流走向和压差分布及气流方向等方面进行分析，以期为国内 mRNA 疫苗商业化生产平台的快速落地提供参考。 一 mRNA 疫苗生产工艺流程及产能计算 mRNA 的生产是以质粒 DNA(plasmid DNA，pDNA)为模板，在酶催化下转录生成 mRNA。欧盟允许企业将 pDNA 的生产委托给医药合同生产组织(Contract Manufacture Organization，CMO)，并将 pDNA作为起始原料来监管 pDNA[9]。然而根据《中华人民共和国疫苗管理法》和我国的《新型冠状病毒预防用疫苗研发技术指导原则(试行)》的要求，将 pDNA模板作为原液的生产工艺，要求企业自主生产pDNA。因此，考虑到平台的完整性和未来的灵活性，本研究中 mRNA 疫苗的生产工艺设计将从 pDNA 的生产开始，着重介绍核心工艺 pDNA 和 mRNA 原液生产的工艺工程设计。 1 mRNA 生产原理及流程 mRNA 疫苗的生产工艺主要包括 3 个部分：pDNA 模板的制备、mRNA 原液(drug substance，DS)的生产、递送载体装载及制剂灌装[10]。本研究将着重介绍核心工艺 pDNA 和 mRNA DS 生产的工艺工程设计，对于第 3 部分制剂及灌装工序等暂不做过多讨论。 商业化规模的 pDNA模板生产通常使用大肠埃希菌体系生产，主要包括上游大肠埃希菌培养、菌体收获和裂解，以及下游的质粒纯化和原液灌装等工艺步骤，具体步骤见图 1A。构建好的 pDNA 系统，经发酵在大肠埃希菌胞内表达目标质粒，而后经裂解后释放至上清液中，通过澄清过滤及层析等纯化步骤去