菌种的选育和保存.ppt

2 、半理性化筛选 随着人们对抗生素生物合成途径及代谢调控机制的了解不断深入，产生了推理选育技术。 指运用遗传学、生物化学的原理，根据产物已知的或可能的生物合成途径、代谢调控机制和产物分子结构来进行设计和采用一些筛选方法，以打破微生物原有的代谢调控机制，获得能大量形成产物的高产突变株的筛选方法。 第三十页，共七十页，2022年，8月28日 如氯霉素的生物合成过程中，芳基胺合成酶为关键酶，当氯霉素浓度到达100u/ml时，可完全抑制该酶的合成。因此，可以考虑选育解除终端产物反馈调节的突变株。 类似还有：新生霉素影响产生菌的琥珀酸脱氢酶活力、制霉菌素影响醛缩酶活力，瑞斯托霉素影响磷酸甘油醛脱氢酶活力等。 第三十一页，共七十页，2022年，8月28日 在青霉素发酵过程中加入苯乙酸或苯氧乙酸作为前体，分别能合成青霉素G和V。但培养基中过量的前体有较强毒性，且可抑制终产物生物合成。选育对毒性前体的抗性突变株，可消除反馈抑制作用。 又如氯化物是灰黄霉素发酵前体，选用耐氯化物的变株，提高灰黄霉素产量。 第三十二页，共七十页，2022年，8月28日 三、现代菌种选育技术 1、 杂交育种：指两个基因型不同的菌株通过接合使遗传物质重新组合，再从中分离，筛选出具有新性状的菌株。 优点：能集中位于不同品种中的优良性状。 缺点：只能利用已有的基因组，并不能产生新的基因。杂交进程缓慢，过程繁琐。 第三十三页，共七十页，2022年，8月28日 2、 原生质体融合用脱壁酶处理将微生物细胞壁除去，制成原生质体，再用融合剂（如聚乙二醇）促进原生质体发生融合，从而获得融合子，这一技术叫原生质体融合。 细胞（A+B—） 细胞（A—B+） 脱壁处理 脱壁处理 原生质体（A+B—） 原生质体（A—B+） 混合 ? 加融合剂 原生质体融合 涂平板（原生质体再生） 形成菌落 检出重组子菌落（A+B+） 第三十四页，共七十页，2022年，8月28日 3、 基因工程（基因拼接技术或DNA重组技术） 是指按照人的意志，将某一生物体(供体)的遗传信息在体外经人工与载体相接(重组)，构成重组DNA分子，然后转入另一生物体(受体)细胞中，使被引进的外源DNA片段在后者内部得以表达和遗传。 第三十五页，共七十页，2022年，8月28日 自20世纪，80年代以来，对链霉素抗生素产生菌分子遗传学的研究取得较大进展。 对多种抗生素的生物合成基因进行了不同程度的研究。比如： 1、增加限速酶基因拷贝数，提高菌种生产能力 限速步骤：在抗生素合成过程中，某些步骤对整个生物合成是至关重要的。 限速酶：控制限速步骤的酶叫限速酶，通过增加限速酶基因的剂量，可能会缓解限速酶引起的“瓶颈”效应。 如构建基因工程菌，将编码限速酶的基因克隆至载体，转化生产菌株，可筛得高产菌株。 第三十六页，共七十页，2022年，8月28日 2、引入抗性基因和调节基因，增加抗生素单位产量 许多抗生素生物合成基因经常与菌种对自身抗生素耐药基因连锁存在，因此可利用高拷贝质粒的基因剂量，提高菌种对自身抗生素的抗性，可提高抗生素产量。 另外，调节基因在抗生素的生物合成中也起很重要的作用，增加正调节基因的拷贝数也能大幅度地提高次级代谢物的合成能力。 第三十七页，共七十页，2022年，8月28日 3、引入血红蛋白基因，改善微生物的工业状况 70年代末在专性好氧菌透明颤菌(Vit-reoscilla)中发现了血红蛋白(VHb),这是迄今在原核生物中发现的唯一一种血红蛋白。对VHb的功能研究表明,它作为一个氧气携带者,能促进氧气扩散到细胞末端氧化酶上,使细胞在贫氧状态下也能很好地生长 。 第三十八页，共七十页，2022年，8月28日 可将Vgb通过质粒转入变青链霉菌和天蓝色链霉菌中,在限氧条件下不仅使菌体生长量增加,还使其放线紫红素产量提高。也可将Vgb引入产黄顶头孢霉菌及产黄青霉菌中,限氧时VHb在前者的表达量较高,而且头孢菌素C的产量比对照菌株提高5倍。 但这些实验仅在“限氧