goosecoid在斑马鱼早期发育中的作用.doc

goosecoid在斑马鱼初期发育中的作用 Wnt/βcatenin信号通路在初期胚胎发育中起到特别重要作用,它调控胚 胎背腹图式发生。goosecoid(gsc)基因是经典Wnt信号通路的下游靶基因之一, 同时对Wnt信号起负反应克制作用。以前报导中,gsc在小鼠和人中突变以后都 会产生骨骼发育不全等症状,而当前对于gsc在斑马鱼中的详细生理功能还不是 很清楚。 以前研究表示,用吗啡基-吗啉基技术(Morpholino,MO)敲低斑马鱼gsc,无 显然缺点。MO因为其作用时间短的限制,不可以很好的研究基因在后期发育中的功 能。而最近几年来的出现的基因编写技术如TALENs,有着靶向高,操作方便的长处,成 为能够用于基因功能的研究的新工具。 为了研究gsc在斑马鱼中的详细功能,我们利用TALENs技术,建立了斑马鱼 gsc突变体模型,用于研究gsc在斑马鱼中的初期发育中的作用。获得的结果如 下:(1)利用TLANEs技术敲除斑马鱼gsc,挑选获得移码缺失7bp的突变体。 (2)gsc杂合突变体自交结果显示,突变体初期无显然背腹缺点,但发育至受精后 第五天(5dpf)时,鱼鳔发育缺点。 测序表示鱼鳔缺失个体为纯合突变体,经统计其占所有胚胎的21%。表示gsc 突变与鱼鳔缺点是有关的。(3)对gsc突变体进行白腊切片及苏木精伊红(HE)染 色,结果显示,突变体鱼鳔构造存在。 (4)gsc突变体中,鱼鳔标志基因hb9原位杂交结果显示,鱼鳔发生未遇到影 响。表示突变体鱼鳔构造正常,但未充气。(5)充气由口、咽、鳔管等多个器官协 调达成,而gsc后期特异表达在咽部。 gsc突变体咽部软骨阿尔新蓝染色,及白腊切片,苏木精伊红染色,结果均表 明突变体咽部构造正常。表示gsc突变后,鱼鳔未充气不是咽部异样致使的。(6) 鱼鳔充气还遇到神经调控,gsc后期表达在头部端脑和间脑,所以可能与鱼鳔充 气有联系。 利用LiCl办理野生型胚胎,发育至第五时节,头部端脑和间脑缺失,鱼鳔不 充气。结果表示,头部神经缺失会致使鱼鳔不充气。进一步工作需要证明gsc突 变体头部神经能否异样,这样就能成立gsc突变后,头部神经缺失进而致使鱼鳔 不充气的联系。