GPNMB促进周围神经损伤修复的作用及其机制.doc

GPNMB促使四周神经损害修复的作用及其体制 四周神经损害是临床常有损害,损害后的重生修复波及好多要素,此中施万 细胞(Schwanncells,SCs)在四周神经损害修复中发挥侧重要的作用。四周神经 损害后,SCs经过上浮多种神经营养因子(neurotrophicfactors,NTFs)和粘附分 子的表达,并在损害局部召募巨噬细胞,与巨噬细胞共同吞噬裂解的轴突和髓鞘, 改良重生微环境;在基膜内形成Büngner’s带,指引轴突重生;轴突重生后,SCs 包绕其形成髓鞘,促使神经功能恢复。 损害远侧端SCs长久失神经,则致使四周神经重生能力降落,影响神经修复。 所以,激活失神经SCs,促使SCs增殖、分化、迁徙、表达和分泌NTFs等,或许通 过增补外源性营养因子、小分子物质等改良重生微环境,是治疗四周神经损害的 重要策略。 非转移性糖蛋白黑色素瘤蛋白B(GlycoproteinNon-MetastaticMelanoma ProteinB,GPNMB),也叫骨活化素(osteoactivin,OA)、树突状细胞肝素整合素配 体(dendriticcell-heparinintegrinligand,DC-HIL)、造血生长因子引诱的 神经激肽-Ⅰ型(hematopoieticgrowthfactorinducibleneurokinin-Ⅰ type,HGFIN),是一种Ⅰ型跨膜蛋白,最早发现于黑色素瘤细胞中。GPNMB宽泛分 布于中枢神经系统,拥有特别重要的作用:如改良记忆、抗炎、减少神经元死亡、 保护神经元。 GPNMB在四周神经系统特别是SCs也有表达,但是,它对SCs和四周神经系统 能否有激活或许保护作用,以及在四周神经重生修复中的作用仍不清楚。鉴于以 上考虑,本研究经过对坐骨神经损害后远侧端进行基因芯片剖析,认识GPNMB在 四周神经损害后的表达变化,并商讨GPNMB对四周神经损害重生修复的作用和对 SCs的作用及其体制,为GPNMB的临床应用供给理论和实验基础。 第一部分坐骨神经损害后GPNMB的表达变化目的:经过对坐骨神经损害后远 侧端进行基因芯片剖析,以认识损害神经远侧端基因表达变化,特别是GPNMB的 表达变化。方法:对坐骨神经横断伤后0、1、3、7、14、21、28d,远侧端进行 基因芯片剖析,STEM剖析挑选表达变化趋向明显性的基因集,并对其进行生物信 息学剖析和聚类剖析。 挑选出此中变化最显然的基因,并使用qRT-PCR、免疫印迹(Western bloting,WB)、免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)对其在转录和蛋白水 平进行考证。结果:在座骨神经横断损害后0、1、3、7、14、21、28d,远侧端 基因表达趋向明显性的基因集共有12个,此中基因集41的表达趋向在座骨神经 损害后先上涨、至峰值、既而降落,而这类变化趋向与远侧端急性失神经SCs的 增殖趋向相一致。 GO、KEGG剖析展望基因集41中的基因可能参加细胞增殖过程。聚类剖析发 现GPNMB是基因集41中表达变化最显然的基因,其表达从1d开始上涨、从3d 开始快速上涨,至7d时上涨至峰值,约为0d的48倍、从14d开始降落,直至 28d降落至0d的15倍左右。 qRT-PCR、WB、IHC结果显示GPNMB的表达趋向和芯片结果基本一致。结论: 在座骨神经损害后,损害远侧端GPNMB表达变化最显然,且呈先上涨、至峰值、继 而降落的趋向,GPNMB可能参加坐骨神经损害后的自我重生修复过程,特别是细 胞增殖的过程。 第二部分GPNMB促使坐骨神经损害重生修复目的:商讨GPNMB对坐骨神经损 伤重生修复的作用方法:坐骨神经重度压迫伤模型建模后3周,于损害处由远及 近、多点注射重组人GPNMB(rhGPNMB)蛋白或PBS,实验大鼠共分为3组:PBS组、 100ngrhGPNMB组、500ngrhGPNMB组,并于4周后进行检测。免疫荧光检测SCs 增殖及轴突、髓鞘的重生;透射电镜察看髓鞘的超微构造并计算G-Ratio值;体外 检测损害神经喜悦传导速度和动作电位振幅;注射rhGPNMB后的每周察看大鼠行 走足印、计算坐骨神经功能指数,检测神经功能恢复状况;察看腓肠肌大概形态、 对腓肠肌称重、HE染色检测其萎缩状况。 结果:rhGPNMB组SCs数目、重生轴突数、重生髓鞘数以及增殖细胞核抗原 的表达均显然多于PBS组,差别拥有统计学意义。100ngrhGPNMB组和500ng rhGPNMB组的SCs数目分别为PBS组的1.55±0.21和2.75±0.28倍,且形状和 摆列上更为规则;重生轴突数为PBS组的1.38±0.19和1.78±0.18倍,且散布更 加平均、直径更大、持续性更完好;重生髓鞘数分别为PBS组的1.1