位点特异性重组与DNA的转座.pptxVIP

位点特异性重组与DNA的转座第1页/共48页第2页/共48页重组的两种形式第3页/共48页一、保守性位点特异性重组（CSSR）1. 位点特异性重组发生在目标DNA上的特异序列中。λ噬菌体基因组嵌入宿主染色体中。3种CSSR重组方式。第4页/共48页参与保守性位点特异性重组的结构。第5页/共48页位点特异性重组的分子机制：attP和attB交错切割发生重组。?λ噬菌体的attP 为P.O.P ,细菌的attB为 B.O.B O 为 attP 和attB相同的核心序列，长15bp，重组发生在此序列中。 attP 235 bp attB 23 bp P----O----P’ B---O---B’ -152 0 +82 -11 0 +11 ▼——G C T T T T T T A T A C T A A ————C G A A A A A A T A T G A T T——— ▲?第6页/共48页2. 位点特异性重组酶利用共价蛋白-DNA中间体切割分离与连接DNA。--位点特异性重组酶有两个家族：丝氨酸重组酶与酪氨酸重组酶。丝氨酸重组酶与酪氨酸重组酶使用的共价蛋白-DNA中间体。第7页/共48页重组酶的家族与功能第8页/共48页丝氨酸重组酶催化的重组。第9页/共48页二、位点特异性重组的生物学作用 细胞与病毒用位点特异性重组可实现各种各样的生物学功能。 --噬菌体利用重组机制在感染时将本身DNA嵌入到宿主染色体中。 --位点特异性重组可用于改变基因表达。 --位点特异性重组还广泛用于DNA复制、同源重组和细胞分裂周期中保持环状DNA分子的结构完整。第10页/共48页 1. λ嵌合酶可促进病毒基因组与宿主细胞染色体的嵌合和分离。IHF弯曲DNA进入DNA结合位点模型。重组位点。2. 噬菌体λ的分离需要一种新的DNA弯曲蛋白。第11页/共48页 3. Hin重组酶反转DNA片段使其他基因表达。沙门氏菌感染人类细胞的电镜图沙门氏菌重组催化DNA反转4. Hin重组需要一个DNA增强子。5. 重组酶将环状多聚DNA分子转化为单体。6. 其他机制。第12页/共48页三、转座转座因子的发现B. McClintock的玉米遗传研究 1951年，B.McClintock根据长期对玉米的遗传研究，提出了转座（transposition）的概念，提出基因可以移动的新观点。Shapiro的E.coli半乳糖操纵子研究 ◆ 半乳糖操纵子—— galK基因编码半乳糖激酶； galT基因编码半乳糖尿苷酰转移酶； galE基因编码半乳糖异构酶。 半乳糖操纵子第13页/共48页 1. 一些遗传元件通过转座（transposition）转到新的染色体位置上。2. 有3种类型的转座因子。--DNA转座子--类病毒反转座子--poly-A反转座子第14页/共48页基因组中的转座子：出现位置与分布第15页/共48页原核生物转座因子类型（1）插入序列（insertion sequence ,IS）◆ E.coli K12中有IS1, IS2, IS3, IS4, IS5。 E.coli的F因子中有IS2, IS3(4个),γ，δ。◆ 末端的序列相同或相近，但方向相反，称为反向重复序列（IR），与其相连的宿主DNA末端会产生正向重复序列（DR）。◆ 仅编码与转座有关的转座酶，转座酶交错切割宿主DNA，然后IS插入，IS两端形成DR。?第16页/共48页IS的结构与功能?第17页/共48页部分IS的结构 IS种类长度（bp）IR （bp）ID （bp）靶的选择拷贝数IS1768239随机5-8I点5IS414281811/12AAAN20TTT1-2I点不详IS10R1329229NGCTNAGCN不详IS9031057189随机不详第18页/共48页靶重复的形成第19页/共48页 （2）复合转座子（composite transposon） ◆ 两端由IS元件组成，元件相同或不相同，方向相同或不相同；两端元件都有功能或仅一侧元件有功能。 ◆ 中心区域编码抗性标记，不同复合转座子的抗性标记不同，例如Kanr 、Camr 、Strr 、Bler 等。 ◆ 两个IS元件能够使它们之间的DNA序列转座。 ?复合转座子的结构第20页/共48页真核生物转座因子 玉米的转座因子（1） McClintock的发现 玉米的红色花青素合成受多基因控制，使胚乳呈紫色。其中任一基因突变都使色素合成受阻，胚乳变白。如果发生回复突变，会导致斑点产生。McClintock发现，色素基因C突变是由“可移动的控制因子”引起的，称为解离因子（dissociator ,Ds），它可插入C基因中。另一可