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微生物限检查解读第1页/共33页 微生物限度检查解读第2页/共33页 一、前言1. 规定了微生物限度检查的定义及检查内容。2. 实验的环境设施及操作的无菌要求。3. 对检查中使用的助溶剂、中和剂、灭活剂的作用及对微生物生长和存活的影响应进行验证4. 霉菌培养温度改为23~28℃，控制菌培养温度改为以35~37℃表示，细菌不变。5. 增加检验结果的单位：10g，10ml。第3页/共33页 二、具体内容1. 检验量： 指明了检验量是一次试验所用的量；对贵重药、微量包装药可酌减，但不规定3g或5g；因沙门菌检查的报告单位为10g或10ml，所以检验量应另增10g或10ml（不含阳性对照用量）。第4页/共33页 2. 供试液制备（与2000年版药典相比的不同点）2000年版药典2005年版药典（1）使用0.9%无菌NaCl溶液使用pH7.0无菌NaCl-蛋白胨缓冲液（2）供试液制备以加一定体积表示供试液制备以加至一定体积表示（3）供试液分三类六种供试液分三类七种，但分类更合理，函盖面更全（4）制备方法有限增加了新的制备方法，对培养基稀释作了进一步详细规定第5页/共33页 3. 细菌、霉菌、酵母菌计数3.1平皿法：3.1.1平皿法两版药典比较3.1.2平皿法菌数报告规则 3.1.3平皿法其他内容，如阴性对照试验等等与2000年版相同第6页/共33页 3. 细菌、霉菌、酵母菌计数（续）3.2薄膜过滤法(为2005年版药典新增内容)3.2.1操作3.2.2阴性对照试验3.2.3培养和计数3.2.4菌数报告规则 第7页/共33页 3.1.1平皿法两版药典比较2000年版药典2005年版药典（1）连续3个稀释级连续2~3个稀释级（2）培养基约15ml培养基约15~20ml（3）每稀释级应作 2~3个平皿每稀释级每种培养基至少制备2个平皿（4）无培养和计数栏增加对同级的两个平板，当菌落数大于等于15个时，则两个平板的菌落数不能相差1倍或1倍以上第8页/共33页 3.1.1平皿法两版药典比较（续）2000年版药典2005年版药典（5）培养基的适用范围，规定比较乱，表达不清，不易理解营养琼脂培养基用于进行细菌计数；玫瑰红琼脂培养基用于进行霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于进行酵母菌计数,或用于特殊品种（含蜂蜜、王浆的液体制剂）进行酵母菌计数第9页/共33页 3.1.2平皿法菌数报告规则 2000年版药典存在许多不足，2005年版作了较大改动1) 规定取两位有效数字报告。在计数及中间计算过程中可多保留一位。2) 2005年版中：（1）与2000版相同 第10页/共33页 3.1.2平皿法菌数报告规则 (续)（2）当比值≤2时，与2000年版相同，以两级均数报告当比值2时，规则与2000年版不同，如比值为2~5时，说明两级之间存在较大差别，应以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数 增加了比值大于5，或出现高稀释级菌数大于或等于低稀释级，应查明原因。如试液有较强的抑菌作用，就不能象上述一样忽略，必须调整方法 第11页/共33页 3.1.2平皿法菌数报告规则(续) （3）与2000年版相同（4）与2000年版相同第12页/共33页 3.1.2平皿法菌数报告规则(续) 3) 还删除了2000年版中不合理的3条;把培养基稀释列为具抑菌活性供试品在任何情况下通用的方法，不仅仅局限于某种情况,而且方法也进行了合理的调整，取样改为2ml，每1 ml所注平皿多个(不定) 第13页/共33页 3.2薄膜过滤法 (为2005年版药典新增内容)3.2.1操作：1）取相当于供试品1g（ml）的供试液[如取供试品1g（ml）或1：10供试液10 ml或1：100供试液100 ml]，加至适量稀释剂 ，混匀，过滤2）冲洗方法、冲洗液、冲洗量（应验证）3）每种培养基至少制备一张膜 第14页/共33页 3.2薄膜过滤法(续)3.2.2阴性对照试验: 等同于“空白试验”，即不加供试品，按同法操作所得结果，每种培养基均需做。第15页/共33页 3.2薄膜过滤法(续)3.2.3培养和计数: 与平皿法相同。但每张滤膜上菌数应不得过100个，如果超过100个，也就是每1g（ml）供试品含菌量较多，可取适宜稀释级供试品1ml检查，例如，1：10取10ml检查，菌落150个（150个/g），则改用1：10取1ml检查，菌落为15个（150个/g） 第16页/共33页 3.2薄膜过滤法(续)3.2.4菌数报告规则:1) 报告每1g（ml）供试品菌落数；2) 若膜上无菌落生长时，如果（每张膜过滤1g(ml)供试品或1：10×10ml供试液，如每张膜过滤1：10×10ml供试液，则报告10个，依此类推，为1乘以稀释倍数第17页/共33页 4. 控制菌检查1) 大肠菌基本