微生物学实验吕爱军.pptxVIP

微生物学实验吕爱军第1页/共117页第2页/共117页微生物学实验第3页/共117页一、实验内容实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查（3学时）实验二 器皿的清洗包装及干热灭菌（3学时）实验三 培养基的制备及高压蒸汽灭菌（3学时）实验四 细菌的单染色及接种技术（6学时）实验五 放线菌的形态观察（3学时）实验六 细菌的革兰氏染色及芽孢染色（3学时）实验七 细菌大小的测定（3学时）实验八 酵母菌形态观察、死活细胞鉴别和数量测定（3学时）实验九 温度对微生物生长的影响（3学时）实验十 平板菌落计数法及比浊法（6学时）实验十一 综合设计性实验（9学时）第4页/共117页二、微生物实验安排与考核课程简介：必修课，45学时、1个学分基础实验：80%，10次自主设计实验：20%，设计方案、实验操作、总结、汇报考试成绩按以下公式计算：平时（10％）＋操作考试（20％）＋笔试（70％）第5页/共117页三、课堂纪律严格遵守实验室规章制度严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退（1次） 迟到（2次） 工作服第6页/共117页四、实验室安全和卫生安全实验室严禁吸烟。注意用水、防电和防火正确使用化学试剂和仪器卫生每次实验需留下6位同学值日，协助保持实验室清洁第7页/共117页实验一 实验室环境和人体 表面微生物的检查第8页/共117页一、实验目的1. 证明实验室环境与体表存在微生物。2. 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。3. 观察不同类群微生物的菌落形态特征。4. 体会无菌操作的重要性。第9页/共117页二、实验原理 平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在合宜温度下培养，1-2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。第10页/共117页三、实验材料 棉签、平皿（1/1人）、酒精灯、废物缸等四、操作步骤1、写标签： 在皿底上2、制培养基3、倒平板4、静置5、接种环境或体表微生物手指（洗前后）、头发、咳嗽、抹布、空气中等6、培养37 ℃培养24h-48h第11页/共117页五、实验报告 观察并记录结果，观察环境中细菌菌落形态与类型。第12页/共117页实验二 器皿的清洗包 装及干热灭菌一、实验目的1. 认识微生物学实验基本材料及其清洗方法；2. 了解消毒和灭菌的原理，掌握干热灭菌方法的操作步骤；3.为后续实验做准备。第13页/共117页二、实验内容（一）器皿的种类1．试管（test tube）：制作琼脂斜面、成液体培养基用、制作无菌水用。2．吸管（又称移液管，pipette）：转移液体菌落 3．培养皿（petridish）：由正反两平面板互扣而成，专为防治空气中微生物的污染而设计的。在培养皿内倒入适量固体培养基制成平板，用于分离、纯化、鉴定菌种、微生物计数以及抗生素、噬菌体效价等。 4．三角烧瓶（Erlenmeyerflask）与烧杯（beaker）：三角烧瓶常用的有100、250、500、1000ml等不同的大小，常用来成无菌水、培养基和摇瓶发酵等。烧杯用来配制培养基和药品。6．载玻片（slide）与盖玻片（cover slip）：用于微生物涂片、染色，作形态观察用。7．接种工具 ：接种环、针、铲、钩。8. 玻璃涂布器。第14页/共117页（二）玻璃器皿的清洗方法 1．新玻璃器皿的洗涤方法：新购置的玻璃器皿含游离碱较多，因在酸溶液内先浸泡数小时。酸溶液一般用2%的盐酸或洗液。浸泡后用自来水冲洗干净。 2．使用过的玻璃器皿的洗涤方法 :(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。 (2)玻璃吸管吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管（包括毛细吸管），使用后应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内，免得干燥后难以冲洗干净。 第15页/共117页(3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在洗衣粉水中煮沸5—10分钟。 检查过活菌的载玻片和盖玻片，吸过活菌的吸管应先投入盛有2%的来苏水或0.25%的新洁尔灭消毒液中浸泡24h后，按上述方法洗涤。带病原菌的培养物应先行高压蒸汽灭菌，然后将培养物倒去，再进行洗涤。玻璃器皿经洗涤后，若内壁的水均匀分布呈一薄层，表示污垢完全洗净，若挂有水珠，则还需要用洗液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。在洁净的载玻片上滴上水滴后应均匀散