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生物合成 的学习材料; DNA复制的概念：以DNA为模板，以4种dNTP为原料，在DNA聚合酶的作用下合成与模板互补的DNA分子的过程。 DNA复制是在细胞分裂前进行的。DNA通过自我复制生成2个与原来分子完全相同的DNA分子，细胞分裂后分别进入两个子细胞中，这样就把遗传信息由亲代DNA分子传给子代DNA分子。 ;第3页/共111页;n1 dATP; DNA复制方式： 半保留复制(semiconservative replication)。DNA在复制时首先两条链之间的氢键断裂两条链分开，然后以每一条链分别做模板各自合成一条新的DNA链，这样新合成的子代DNA分子中一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式为半保留复制。 ;DNA Replication is semiconservative Each DNA strand serves as template for the synthesis of a new strand, producing two new DNA molecules, each with one new strand and one old strand. This is semiconservative replication ; 第一节 参与DNA复制的主要酶类与蛋白因子 （DNA复制系统）; 拓扑异构酶Ⅱ：又称为旋转酶（gyrase），由两个A亚基和两个B亚基组成，即A2B2。它能使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，当它引入负超螺旋以消除复制叉前进带来的扭曲张力时，需要由ATP提供能量。两种拓扑异构酶在DNA复制、转录和重组中均发挥重要作用。 ; 解旋酶（Helicase，DnaB）：也称为解链酶。在复制叉处在其它因子的参与下利用水解ATP将DNA双股链解开。 其它因子主要包括： DnaA，识别大肠杆菌复制原点OriC，启动解链过程；DnaC，帮助解链酶（DnaB）结合 每解开一对碱基，需要水解2分子ATP。解旋酶不只有一种，还有参与转录、DNA修复、DNA重组等过程的解旋酶。 ; 单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB protein）：与解开的DNA单链结合，防止碱基对的重新结合。 大肠杆菌的SSB蛋白由4个相同亚基构成，其功能在于稳定解开的DNA单链，阻止DNA复性和保护单链部分不被核酸酶降解。原核生物的SSB蛋白与DNA的结合表现出明显的协同效应：当第一个分子结合后，其他分子与DNA的结合能力可提高103倍。因此一旦结合反应开始，即迅速扩展，直至全部单链DNA都被SSB蛋白覆盖。SSB蛋白可以重复利用 ;解旋酶; 引物酶（primase，DnaG）：又称引发酶，一种特殊??RNA聚合酶，用于合成RNA引物。已知DNA聚合酶催化DNA片段的合成要求一段与模板互补、带有3-OH的DNA 或RNA片段作引物。E coli 是由dnaG 基因编码。 该酶分子量约为60 000，该酶单独存在时相当不活泼，只有与其他蛋白质相互作用结合成一个复合体时才有活性，这种复合体称为引发体（primosome）。合成的引物是长约5~10个核苷酸的RNA。一旦RNA引物合成，就可以由DNA聚合酶Ⅲ在它的3′-OH上继续催化DNA新链的合成。 ; DNA聚合酶（DNA polymerase）是以DNA为模板，催化底物（dNTP）合成DNA的酶类，普遍存在于生物体内。它们的作用方式基本相同，都需要dNTP、Mg2+、模板DNA和引物，在DNA模板指导下，催化底物加到引物的3′-OH上，形成3′,5′磷酸二酯键，由5′→3′方向延长DNA链，见下图 。引物是DNA合成所必需的。;大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ由一条分子量为101 000的单一多肽链组成，多肽链中含有一个锌原子。每个大肠杆菌细胞约有400个分子的DNA聚合酶Ⅰ。DNA聚合酶Ⅰ的功能如下： ① 5’→3’聚合酶活性，即当底物和模板存在时，DNA聚合酶Ⅰ可使脱氧核糖核苷酸逐个加到引物的3′-OH末端的多核苷酸链上，在37℃条件下，每分子DNA聚合酶Ⅰ每分钟可以催化大约1000个脱氧核苷酸的聚合； ② 5’→3’外切酶活性，它可以及时切除复制起始合成的RNA引物； ③ 3’→5’外切酶活性，起校对功能，它可以切除聚合上去的错误核苷酸，从而可使复制的忠实性提高1 000倍。 DNA聚合酶Ⅰ可以被蛋白酶切成2个片段，大片段（68 000）称为Klenow，具有5′→3′聚合酶活性和3′→5′外切酶活性，是分子生物学研究中常用的工具酶。小片段(35 000)具有5′→3′外切酶活性，可以切除少量