动物基因组DNA总RNA测定.pptxVIP

动物基因组DNA总RNA测定;目的要求 ;理论基础;核酸分离、纯化原则;注意：;1、RNA的提取与测定;工业提取RNA的方法;浓盐法：使用10％氯化钠的溶液，同时在90摄氏度热提取3-4小时，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。经冷却，离心后上清液由乙醇沉淀RNA。 稀碱法：使用0.2％氢氧化钠裂解酵母，然后用酸中和，除去蛋白和菌体，上清液由乙醇沉淀RNA，或调等电点PI 2.5 沉淀。;原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。 方法：先用组织捣碎机将动物肝脏制成组织匀浆，再用0.14mol/L 氯化钠溶液把细胞中的 RNP 提取出来，最后用酚将RNA和蛋白质分开。;RNA 提取;RNA含量测定方法; 将样品配制成含5 ~ 50μg/mL核酸的溶液，于紫外分光光度计上测定260nm吸收值，计算核酸浓度： RNA浓度（μg/mL）= 式中：O.D260为260nm波长处吸收值；L为比色杯的厚度；0.024为每毫升溶液内含1微克RNA的光吸收值； ; 在酸性环境中，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸，当有还原剂存在时磷钼酸立即转变蓝色的还原产物―钼蓝。 H3PO4+12H2MoO4→H3P(Mo3O10)4+12H2O ↓还原剂 钼 蓝 钼蓝最大的光吸收在650-660nm波长处。当使用抗坏血酸为还原剂时，测定的最适范围为1-10微克磷。;RNA 含量测定;试剂和器材;思考题 RNA 提取方法有几种？有什么优缺点？ RNA 提取过程中应注意什么？ ;DNA的提取及含量测定;去除蛋白的常用方法;DNA的提取;DNA含量测定方法;DNA含量测定; 管号 试剂(mL) ;试剂和器材;思考题;工 艺 图;感谢观看！