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肺结核实验室诊断第1页/共63页 2黛玉脸色苍白， 瘦骨嶙峋，经不断咳嗽及吐血后，香消玉殒，结束了一场哀怨凄绝的爱情故事。 第2页/共63页 3我国结核病疫情 全球结核病第二高负担国家，结核病疫情表现有“六多” 。一、感染人数多——5.5亿人感染过结核菌，约占全国人口 的45％，高于全球平均水平。二、患病人数多——活动性肺结核、传染性肺结核患病率 分别为367/10万和122/10万，三、新发患者多——全国每年新发活动性肺结核患者145 万， 其中传染性 肺结核患者65万。 四、死亡人数多——全国每年约有13万人死于结核病。五、农村患者多——全国约有80％的结核病人集中在农村， 主要在经济不发达的中西部地 区。六、耐药患者多——全国结核病耐药率高达28％。 第3页/共63页 4结核病实验室诊断方法介绍第4页/共63页 5概 述结核病人的细菌学检查不仅是发现传染源的主要途径和手段，也是结核病确诊和制订抗痨方案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。由于结核菌的遗传特性决定其生长周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。第5页/共63页 6实验室诊断方法病原学诊断辅助诊断 第6页/共63页 7病原学诊断一、涂片抗酸染色镜检法，二、液基夹层杯结核杆菌检验三、荧光染色法四、培养法 五、液体培养＋显微镜观察药敏试验六、快速培养检测法，七、色谱法 八、分子生物学法 九、噬菌体生物扩增法第7页/共63页 8一、涂片抗酸染色镜检法： 国内大多采用厚涂片，比薄涂片法可提高阳性率；涂片萎尼抗酸染色法能保存较久，可备复查；因费时、繁琐，综合医疗单位常因重视不够，致涂阳检出率低于5%，专业机构涂阳率可达到30%。国外痰涂片阳性率可达30%～40%，反复多次查，可增加到65%～75%；第8页/共63页 9涂片优点：简便、快速、价廉 第9页/共63页 10 涂片的缺点敏感性低：5000～10000条菌／ml特异性差：所有分枝杆菌均可着色无法区别死菌与活菌：结果均为阳性第10页/共63页 11痰菌假阴性原因病变是封闭或开放；病变性质和其中能够排出的菌量和排出时间间歇；结核分枝杆菌形态多样性；第11页/共63页 12二、液基夹层杯结核杆菌检验工作原理 将经过消化灭活处理液处理的痰液、或其他体液标本混悬液置于具有符合光学要求基片的夹层杯中，经过专业离心机离心将混悬液中细菌或细胞牢固附着基片上，并在夹层杯中直接染色后取出基片在载波片上封片，置显微镜下观察。第12页/共63页 13优点：1、操作方便，易于掌握。2、片中结核菌分布均匀，染色效果清晰3、液基结核菌制片技术较离心浓缩集菌法有显著提高： 该方法将所有消化后标本的抗酸杆菌均完整地保留于液基薄片中，从而显著提高了检出率。4、安全性有所提高： 消化，制片，烤片，染色均在彭氏杯中完成，操作人员不直接接触标本。 采用结核专用消化液，可有效杀灭结核分支杆菌，更好的提高了操作的安全性。 第13页/共63页 14三、荧光染色法：是涂片法中阳性率较高，较快速的方法，集菌与荧光染色相结合，则荧光显微镜下的抗酸杆菌阳性率可达50%，荧光法的缺点： 假阳性率较高， 保存时间短，不到4个月第14页/共63页 15四、培养法一般都用改良罗氏固体培养基接种后第3第7天观察，以后每周观察一次菌落生长情况，第8周若仍无生长，报告为阴性。优点：准确，灵敏度略高于涂片法；可以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种鉴定和药敏试验.缺点：诊断周期长，最快也需要6周。有一定的污染率第15页/共63页 16第16页/共63页 17培养假阴性的原因个别细菌营养要求的特异性； 细菌和细菌营养代谢异质性； 细菌培养前处理对细菌活性影响； 第17页/共63页 18 分枝杆菌药物敏感性试验绝对浓度法检测分枝杆菌药敏实验是采用含药罗氏培养基进行的。常用药物终浓度（μg/ml） ____表 1 绝对浓度法含药培养基中的药物终浓度_____ 药 物 浓 度（μg/ml） 低浓度 高浓度 异烟肼 　 1μg/ml　　 10μg/ml利福平　　　　 1μg/ml　 10μg/ml