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第1页/共9页实验六PCR反应的学习课件第2页/共9页RNA电泳理想结果第3页/共9页RNA电泳理想结果第4页/共9页实验六PCR反应一、实验目的 了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。二、实验原理 PCR技术是通过模拟体内DNA复制的方式，在体外选择性地将DNA的某个特殊区域扩增出来的技术。 PCR的过程：高温变性：将反应体系置于高温下变性，使双链DNA解链为两单链低温退火：引物与模板链结合，形成部分双链DNA第5页/共9页中温延伸：Taq DNA聚合酶使引物从5′端向3′端延伸，4种dNTP掺入合成新的DNA互补链反复进行这种变性、退火和聚合反应循环，可使两端引物限定范围内的DNA序列以指数形式扩增。第6页/共9页三、实验材料 实验二所提质粒pET-cam5。 （请先按如下步骤操作：取0.5μl实验二抽提的质粒置于一PCR管，加入19.5μl灭菌蒸馏水，混匀后作为这次PCR实验用DNA模板)四、试剂rTaq 酶、10 x PCR bufferdNTP mixtrures (10mM)前向引物 (P1) (10uM)反向引物 (P2) (10uM)1.0% 琼脂糖凝胶 第7页/共9页五、实验步骤1、PCR反应混合液的配制 (50μl) 10 x PCR buffer 5μl dNTP mixture 4μl 前向引物P1 2μl 反向引物P2 2μl 模板DNA 0.1μl rTaq酶0.5μl去离子水36.4μl 所有试剂按量仔细添加后，轻轻混匀，稍离心后即可，为了防止反应混合液蒸发，最后添加20μl矿物油。 第8页/共9页2、PCR仪的参数设置 94℃ 4 min 94 ℃ 30sec 62 ℃ 30sec 72 ℃ 20sec 72 ℃ 5 min40 cycles 3、琼脂糖凝胶电泳检测 反应结束后，取5μl PCR产品，加入1μl 6 x loading buffer，混匀后点样，电泳15min。其余45μl PCR产品保存在-20℃冰箱中，下次实验使用。第9页/共9页感谢您的欣赏