YC_T 406-2011 烟用添加剂中马兜铃酸A的测定 高效液相色谱法.docx

ICS 65.160 X 85 备案号：33251—2011 中 华 人 民 共 和 国 烟 草 行 业 标 准 YC/T 406—2011 烟用添加剂中马兜铃酸 A 的测定 高效液相色谱法 Determination of aristolochic acid A in tobacco additives— High performance liquid chromatographic method 2011-08-02发布 2011-09-01 实施 国家烟草专卖局 发 布 I YC/T 406—2011 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会烟用材料分技术委员会(SAC/TC 144/SC8)归口。 本标准起草单位：云南烟草科学研究院、红塔烟草(集团)有限责任公司、红云红河烟草(集团)有限 责任公司。 本标准主要起草人：张承明、陈永宽、缪明明、者为、王璐、孟昭宇、贺兵、夏建军、杨光宇、陆舍铭、 宾婕。 1 YC/T 406—2011 烟用添加剂中马兜铃酸 A 的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了烟用添加剂(香精和料液)中马兜铃酸 A 的测定方法——高效液相色谱法。 本标准适用于烟用添加剂(香精和料液)中马兜铃酸 A 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 YC/T 145.10—2003 烟用香精 抽样 3 原理 采用含0.1%甲酸的甲醇-水混合溶剂萃取烟用添加剂中的马兜铃酸A, 经高效液相色谱仪分离，以 紫外检测器测定，外标法定量。 4 试剂与材料 除特殊要求外，均使用分析纯试剂。 4.1 水，符合 GB/T 6682 中一级水的要求。 4.2 乙腈，CH?CN, 色谱纯。 4.3 甲酸，HCOOH。 4.4 甲醇，CH?OH。 4.5 马兜铃酸A,CHuNO? (CAS:313-67-7), 纯度97%。 4.6 甲醇-水混合溶剂，体积比9:1。 4.7 萃取溶剂：取1 mL 甲酸(4.3)置于1000mL 容量瓶中，用甲醇-水混合溶剂(4.6)定容至刻度。 4.8 标准溶液 4.8.1 一级标准储备液 称取100mg (精确至0. 1 mg) 马兜铃酸 A(4.5), 用萃取溶剂(4.7)溶解转移至100 mL 容量瓶中， 定容至刻度并摇匀。在2℃~8℃下保存，有效期1个月。 4.8.2 二级标准储备液 准确移取5.0mL 一级标准储备液(4.8.1)至100 mL 容量瓶中，用萃取溶剂(4.7)稀释定容至刻度 并摇匀。在2℃~8℃下保存，有效期1个月。 4.8.3 标准工作溶液 分别准确移取100μL、300μL、500μL、1000μL、2000μL、4000μL二级标准储备液(4.8.2)至 50mL 容量瓶中，用萃取溶剂(4.7)定容至刻度，得到系列标准工作溶液。即配即用。 2 YC/T 406—2011 5 仪器设备 常用实验仪器及下述各项： 5.1 高效液相色谱仪，配置柱温箱、梯度洗脱功能和紫外检测器。 5.2 分析天平，感量0.1 mg。 5.3 振荡器，最大转速应不小于200 r/min。 5.4 离心机，最大转速应不小于8000 r/min。 5.5 有机相滤膜，0.45μm。 6 抽样 按照 YC/T 145.10—2003 的规定抽取样品。 7 分析步骤 7.1 样品处理 称取2g(精确到0 . 1 mg) 试样于100 mL 具塞锥形瓶中，准确加入50 mL 萃取溶剂(4.7),用 150 r/min 振荡萃取10 min。 取 3mL 萃取液置于10mL 具塞离心试管中，在5000 r/min 条件下离心 10 min,取 1mL 上清液过有机相滤膜(5.5),滤液用高效液相色谱仪分析。 若待测试样溶液的浓度超出标准工作曲线浓度范围，则对样品前处理适当调整后重新测定。 7.2 色谱条件 以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。 ——Ci?色谱柱，规格：填料粒径3.5μm,250 mm(长度)×4.6 mm (内径); ——流动相 A:0.1% 的甲酸乙腈溶液(体积分数); ——流动相 B:0.1% 的甲酸水溶液(体积分数); ——柱温：35℃; ——流速：1.0 mL/min; ——进样体积：10μL