分解纤维素霉菌的分离,纯化与鉴定-文档.docx

分解纤维素霉菌的分别,纯化与鉴定 : Two strains of fungi decomposing cellulose were isolated from the soil of our campus taking the filter paper cellulose as carbon resource.For these strains,the experiments of decomposition of filter paper,determinations of CMC enzyme activity,FPA and natural cellulase activity were done.The results showed that:(1)It was the faster that the filter paper was decomposed by one black strain,and the filter paper was changed into paste during less than for 12 h.(2)CM C enzyme activity,FPA and natural celluloseactivity of the strain were highest in five strains,reached 2.884(mg/mL)?30 min,0.36(mg/mL)?hand 2768(mg/mL)?d,respectively. 引言 纤维素是全部植物的主要组分,构成了植物干物质的 1/3～ 2/3,世界上纤维素的年产量估量可达 4×1010t(Pierre Beguine,1990),因而,纤维素是世界上最丰富而又不断生的资源。有取之不尽,用之不竭的特点。然而,这种资源的大局部现在是作为废物而被抛弃掉。在自然界中,这些“废物”是通过纤维素分解菌,即能产生纤维素酶的微生物将其自然分解的。在我国纤维素资源极为丰富,每年仅农作物秸秆产量就高达 7.0×108t, 约相当于我国北方草原年打草量的 50 多倍,绝大局部地分没有得到充分利用。在农村,秸秆主要用作燃料、畜禽饮料与积肥, 不仅利用率低,还对环境造成污染[1]。因此,合理开发和科学利用农作物秸秆这一丰富的可再生资源是各国政府及宽阔科技工 作者格外关注的问题。但是纤维素很难被分解利用,如何将纤维素转化为能直接利用的资源和能源是摆在人们面前的一个难题。利用微生物产生的纤维素酶将其转化为人类所需的能源、食品和化工原料具有重要的现实意义。近年来,对秸秆类纤维素物质的利用主要承受生物法,既利用微生物将纤维素、半纤维素降解并转化为菌体蛋白的方法。因此,分别和筛选高酶活的菌种显得尤为重要。本争论在广泛搜集试材的根底上,分别筛选到一株酶活力高的纤维素分解菌。 材料和方法 样品来源样品分别为富含纤维素分解菌的玉米地土壤、牛粪和酒糟。 培育基①分别平板培育基;②液体培育基。 滤纸纤维素的制备将滤纸剪成 1cm 宽,6cm 长的滤纸条。 菌株的分别、纯化承受稀释涂布平板法进展菌种的分别和纯化。 菌落的观看和菌的鉴定对细菌进展革兰氏染色,显微镜观看培育不同时间的细菌形态。将纯化培育的细菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、棉子糖、木糖、阿拉伯糖,并进展 明胶液化、淀粉水解、V-P 测定、吲哚试验、H2O2 酶试验、硝酸盐的微量发酵管,37℃培育 24―48h 后观看结果。依据《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》进展鉴定。 酶活力测定 标准曲线的绘制本争论承受 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法(DNS)测定酶解液中复原糖含量,取 9 支比色管,分别按表1 挨次参加各种试剂,将各管溶液混匀后,在 721 分光光度计上(520 nm)进展比色测定,用空白管溶液调零后,测定各管光密度值.以葡萄糖浓度为横坐标,光密度值为纵坐标,得标准曲线 (图1)。 滤纸分解度的观看在试管中参加酶液 8 mL,再参加pH 4.4 柠檬酸缓冲液 2 mL,摇匀后参加滤纸条(1cm×6cm)和几滴二甲苯,置于 50℃恒温水浴中静置反响 24 h 后稍加震惊,观看其酶活力的分解强度:(+)滤纸边缘膨胀;(++)滤纸整齐膨胀并下 弯;(+++)滤纸不定形;(++++)滤纸全成糊状.假设滤纸不到 24 h 全局部解,则登记到达全部被分解的时间. CMC 酶活力测定移取酶液 0.5 mL 于试管中,参加含质量浓度为 0.5g CMC―Na 的柠檬酸缓冲液(pH 4.4、0.05 mol/L)1.5 mL,然后在50℃水浴锅准确作用 30 min 后,马上按DNS 法测定糖。 酶活力计算公式:=[(mg/mL)?30min] 式中:葡萄糖量―― 从标准曲线上查得的葡萄糖值(rag) 滤纸糖化