DB64 1009_2014  宁夏水稻品种真实性鉴定 SSR标记法.docx

ICS 65.020 B 04 DB64 宁 夏 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/T 1009—2014 宁夏水稻品种真实性鉴定 SSR 标记法 Identification for genuineness of Ningxia rice varieties by SSR markers 2014-10-15实施2014-10-15发布 2014-10-15实施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发 布 DB64/ T 1009—2014 前 言 本标准参照NY/T 1433-2014 《水稻品种鉴定技术规程 SSR标记法》制定。 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。 本标准主要起草单位：宁夏农林科学院农作物研究所、宁夏农牧厅种子工作站、中国农业科学院作 物科学研究所。 本标准起草人：孙建昌、马静、李华、刘炜、安永平、王兴盛、韩龙植、殷延勃、来长凯、王彩芬。 1 DB64/ T 1009—2014 宁夏水稻品种真实性鉴定 SSR 标记法 1 范围 本标准规定了宁夏水稻 (Oryza sativaL.)品种真实性SSR标记鉴定的原则、仪器设备及试剂、溶 液配制、引物信息、检测样品要求、检测程序、数据记录与统计以及判定标准。 本标准适用于宁夏水稻品种的真实性鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 3543.2-1995 农作物种子检验规程扦样 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 品种真实性 variety genuineness 检测样品与该品种名称一致的标准样品的降服程度。 3.2. 标准样品 standard variety 省级以上农业行政主管部门收集并保存的与品种名称相符的种子样品。 3.3 SSR 引物 SSR primer 是与待扩增的靶DNA (模板DNA) 区段两端序列互补的寡核苷酸片段，其长度通常在18个～28个核苷 酸之间，由人工合成。其作用为PCR扩增的起点。 3.4 SSR 位点 SSR locus SSR标记坐落于染色体上的位置。 3.5 等位变异 allele 2 DB64/ T 1009—2014 在同一SSR 位点上，因不同品种间DNA片段长度或核苷酸序列组成的差异而形成的不同DNA片段。 3.6 基因型 genotype 本标准中提到的“基因型”是指某一SSR 位点的各种等位变异。 3.7 带型 banding pattern 在凝胶上呈现的DNA片段。带型即等位变异的表现型。 4 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 CTAB: 十六烷基三甲基溴化铵 (cetyltrimethylammonium bromide) DNA: 脱氧核糖核酸 (deoxyribonucleic acid) dNTPs: 脱氧核苷三磷酸 (deoxyribonucleoside triphosphates) PAGE: 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamide gelelectrophoresis) PCR: 聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction) SSR: 简单重复序列 (simple sequence repeat) Taq酶：耐热DNA聚合酶 (Taq-DNA polymerase) 5 原则 不同水稻品种基因组DNA中，存在着能够世代稳定遗传的简单重复序列(SSR)重复次数的差异，这种 差异可以通过从水稻幼苗等组织中提取DNA, 用SSR引物进行扩增，经电泳获得DNA条带加以区别，从而 对品种的真实性进行鉴定。 6 仪器设备及试剂 见附录A。 7 溶液配制 见附录B。 8 引物信息 见附录C。 9 检测样品要求 9.1 检测样品种类 3 DB64/ T 1009-2014 检测样品可以为种子或幼苗、叶片、穗等组织器官。 9.2 样品的提交 9.2.1 检测样品为种子的，重量不低于15g 或不少于500粒。检测样品为幼苗、叶片或穗的，应不低 于50个个体的数量。检测样品数量低于上述规定的，则需在检验报告中注明。采用单个个体独立检测， 单个个体独立检测的试样应至少含有1