NY_T 3854-2021CN 看麦娘对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程.docx

ICS 65.100 CCS B 17 NY 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 3854—2021 看麦娘对乙酰辅酶A 羧化酶抑制剂类 除草剂靶标抗性检测技术规程 Technical code of practice for detection the target-site resistance of Alopecurus aequalis Sobol. to acetyl-coenzyme A carboxylase inhibiting herbicides 2 0 2 1 - 0 5 - 0 7 发 布 2021-11-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 1 NY/T 3854—2021 前 言 本文件按照GB/T1.1 2020 《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：中国农业科学院植物保护研究所。 本文件主要起草人：崔海兰、李香菊、陈景超、李政、彭立存、郭小桐。 1 NY/T 3854—2021 看麦娘对乙酰辅酶A 羧化酶抑制剂类除草剂 靶标抗性检测技术规程 1 范围 本文件规定了看麦娘(Alopecurus aequalis Sobol.)对乙酰辅酶 A 羧化酶(acetyl-coenzyme A car- boxylase,ACCase)抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程的基本要求及注意事项。 本文件适用于看麦娘对乙酰辅酶A 羧化酶抑制剂类除草剂产生靶标抗性的有关检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 NY/T 1667—2008 农药登记管理术语 NY/T 1859.7—2014 农药抗性风险评估 第7部分：抑制乙酰辅酶A 羧化酶除草剂抗性风险评估 NY/T 3287—2018 日本看麦娘对乙酰辅酶A 羧化酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程 3 术语和定义 NY/T 1667—2008 、NY/T 1859.7—2014 、NY/T 3287—2018界定的术语和定义适用于本文件。 4 检测程序 4.1 材料培养 选择无看麦娘种子、无除草剂残留的农田地表土，混合20%～30%的草炭土，混合均匀后装入直径不 小于10cm 的培养钵；待测种群及敏感对照种子分别定量均匀撒播在土壤表面，覆土约1cm, 采用盆钵底 部渗灌方式补充水分，土壤相对湿度保持在60%～70%;置于25℃:15℃(D:N), 光周期12 h:12 h (L:D) 条件下培养。待看麦娘长至2叶1心期，间苗，每盆保留长势一致的10株。 4.2 生物测定 待植株长至3叶1心期，用待测除草剂(ACCase 抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，药剂处理至少 设置5个剂量，每个剂量不少于4次重复，每个重复10株。施药21d 后，调查每个处理的存活植株数、地 上部分鲜重或干重，按公式(1)计算杂草株防效、鲜重或干重抑制率。 ( 1) 式中： Y ——株防效、鲜重或干重抑制率，单位为百分号(%); M. 除草剂有效剂量X ga.i./hm2 处理后存活植株数、地上部分鲜重或干重的数值，单位为株或 克(g); Mo——对照总株数、地上部分鲜重或干重的数值，单位为株或克(g)。 以杂草株防效、鲜重或干重抑制率为指标，按公式(2)计算生长抑制中量。 ( 2) 式中： Y ——株防效、鲜重或干重抑制率，单位为百分号(%); C ——Y值下限，单位为百分号(%); D ——Y 值上限，单位为百分号(%); 2 NY/T 3854—2021 X ——除草剂有效剂量的数值，单位为克每公顷(ga.i./hm2); GR - 生长抑制中量的数值，单位为克每公顷(ga.i./hm2); b ——斜率。 按公式(3)计算抗药性倍数RI。 … …………… ………… ……… (3) 式中： Rl - 抗药性倍数； GRR—— 抗药性种群生长抑制中量的数值，单位为克每公顷(ga.i./hm2); GRas—— 敏感性种群生长抑制中量的数值，单位为克每公顷(ga.i./hm2)。 4.3 靶标基因检测 4.3.1 DNA 提取 取杂草幼嫩叶片，约200 mg, 采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 法或商品化试剂盒提取总DNA。 每个抗药性种群随机检测抗药性植株