拄层析分离色素实验报告.pdfVIP

柱层析分离色素 一、【实验目的】 1．了解柱层析的分类,掌握各种柱层析的原理。 2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。 二、【实验原理】 叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素 a、 叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其 认识和了解的前提。利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性,可用 95%乙醇或无 水乙醇提取. 分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等.柱层析法是色谱法中的一种， 它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂 （即移动相）的溶 解度不同将各组分分离。常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。 吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉 状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶)，当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸 附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。由于不同化合物在吸附柱 上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速 度下移,形成色带。继续用溶剂洗脱,吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出 ,整 个层析过程进行反复的吸附-解析—再吸附-再解吸。用柱层析法可以分别收集各 组分，并逐个鉴定. 本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中 （压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色 素的石油醚提取液倾于吸附柱上,色素即被吸附。由于色素的种类不同,被吸附的 强弱不同,就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不 同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱,从而达到叶绿体主要的4 种色素（叶绿素 a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素)的分离。 三、【实验材料】 原料: 新鲜的菠菜叶 试剂 ： 1． 无水乙醇或 95%乙醇 5。三氧化二铝 2． 石英砂 6．饱和氯化钠溶液 3． 丙酮 7.水硫酸钠 4． 石油醚 （60-90℃） 8 洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材 : 层析柱（1×30cm）， 研钵， 蒸馏装置， 脱脂棉， 天平， 烧杯， 过滤漏斗, 玻璃棒， 锥形瓶， 分液漏斗， 试管 ， 铁架台 四、【实验操作】 1． 色素的提取： 20 克菠菜，加少许石英砂，再加 20 毫升无水乙醇研磨成浆,脱脂棉 过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入 30 毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中，再加入 40 毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入 20 毫升水震荡 洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中,加入无水硫 酸钠干燥 5 分钟，备用. 2．样品的浓缩： 将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体 5—8 毫升左右，以备加样使用。 3．层析拄的制备: 15 克碱性三氧化二铝加入 30 毫升石油醚搅拌,浸泡 10min..在层析 拄内加入一团棉花在底部，再加入石英砂 0.5cm 以上,然后用石油醚半充 满柱子,再将浸泡好的三氧化二铝倒入柱内，倒时应该缓慢，重复使用下 面的石油醚，直到装完。用石油醚洗柱内壁，顶部加一小团棉花,然后再 填入石英砂 0.5 厘米高. 3．样品的分离层析：吸附层析分离色素 打开层析拄下部开关，向拄内加入 2 毫升浓缩液,至液体没入砂内， 再加入石油醚冲洗拄壁,液体浸入砂内，加洗脱液开始层析，可以看到不 同色带如图片 1，直至第一条色带洗脱完毕,在拄下面用试管接收第一条 色带的洗脱液，如图片 2。 五、【实验结果】 实验结果如下图: 图一：层析柱中出现黄色带 图二：提取出的黄色胡萝卜素 结果分析： 洗脱过程