核酸杂交技术.pptxVIP

核酸杂交技术;;;;;核酸分子杂交的基本原理;2、融解温度 (Melting Temperature, Tm)定义：在DNA热变性时，其A260的升高达最大值一半时的温度。;3.复性 变性DNA经过一定处理重新形成双螺旋的过程。;;;探针的种类;;;;;;;;随机引物：含有各种可能排列顺序的寡核苷酸片段的混合物。;; 条件是有5’-OH存在，人工合成寡核苷酸最常用；双链DNA需用碱性磷酸酶切除5’-P后再标记;;;;;;碱性磷酸酶显色反应示意图;HRP酶显色反应示意图;; 荧光素：一类能在激发光作用下发射出荧光的物质 荧光显微镜观察、免疫组织化学法 ;化学发光是指化学反应中释放的能量以光的形式发射出来形成检测信号。 化学发光酶免疫技术中目前常用的酶有碱性磷酸酶及辣根过氧化物酶 发射光线的强度反映了酶的活性，反应了杂化分子的量。;采用发色体检测的最大益处是可同时检测一个以上的杂化分子 每种探针分别用不同的报告基团如生物素、荧光素和地高辛标记并同时与固定在滤膜上的核酸杂交 采用不同的链霉抗生素或抗体-酶和相应底物组合;;核酸分子杂交分类;分子杂交技术一般过程;;;;;Southern印迹杂交的基本步骤： ;;Southern杂交的应用 ;;Northern杂交应用 ;;液相杂交;;（一）基本操作步骤： ; （二）原位杂交的应用;荧光原位杂交(FISH, Fluorescence in situ Hybridization);核酸分子杂交技术类型 ;;;;;;;;;;;Questions;感谢观看！